[发明专利]一种具有促进血管生成的王不留行黄酮苷的应用

说明书

技术领域

一种具有促进血管生成的王不留行黄酮苷应用，属于中药应用技术领域。本发明涉及一种具有促进血管生成活性的王不留行黄酮苷，阐明其在医药，食品、化妆品方面的新用途。 

背景技术

王不留行为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria segetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟种子。王不留行中主要含有三萜皂苷、黄酮苷、环肽、类脂和脂肪酸、单糖等成分[1、李帆，梁敬钰.王不留行的研究进展[J].海峡药学，2007，19(3)：1-5]。实验发现王不留行黄酮苷具有促进血管新生的作用，其结果为下式所示： 

血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell)具有多种生理功能，参与机体的凝血、免疫、物质转运和生物活性物质释放等生活活动。研究表明[2、Reinhart K，Bayer O，Brunkhorst F，et al.Markers ofendothelialdamage in organ dysfunction and sepsis[J].CritCare Med，2002，30(5)：302.]，内皮细胞的损伤及功能紊乱与多种疾病的发生密切相关，包括高血压、冠心病、糖尿病、慢性肾功能衰竭等。引起内皮细胞损伤是一个复杂的病理过程，参与的因素很多，如糖尿病、高血脂和高血压等多种疾病，氧化应激以及炎症反应等等。心血管介入术主要是机械刺激血管内皮，通过刺，戳，擦，挤伤导致损伤，当被导管继续损伤扩大而伴发急性血栓，导致血管内皮剥脱的严重内膜损伤[3、方宏，冯义柏.血管内皮细胞损伤与常见心血管疾病[J].心血管病学进展，2001，22(1)：34-36]。冠心病心肌缺血坏死的发生，与病变血管的闭塞直接相关[迟路湘.肝素与冠心病血管生成治疗认识进展[J].微循环学杂志，2002，12(1)：41-42.]。血管内皮细胞的损伤是多种血管性疾病的主要环节，保护血管内皮功能是防治血管性疾病的关键环节。因此，研究保护血管内皮功能的药物成为治疗血管性疾病的重要措施。针对内皮细胞损伤的不同环节进行的药物研究也在进行中，包括抑制黏附分子生成和释放、拮抗黏附分子作用的药物、作用于LOX-1受体的药物等等，都受到了研究人员的重视。在血管生成中，促进侧枝循环的建立是改善心肌缺血的另一重要途径，临床研究证实，增加侧枝血流量又可增加血流剪切力，刺激血管生长，可缓解和治疗心绞痛等缺血性心脏病。表皮生长因子(EGF)在促进内皮细胞增殖中表现为可刺激组织修复细胞增殖，趋化炎性细胞，表皮细胞和成纤维细胞向伤口聚集，加剧创面愈合，此生理效应可预防和治疗瘢痕修复。经过调研，未见我国学者对王不留行黄酮苷促进血管生成的相关文献报道(自CNKI、维普中国期刊网)，因此王不留行黄酮苷在促进血管生成的药理、药效等研究领域尚处于空白阶段。本研究发现王不留行黄酮苷具有促进内皮细胞生成的作用，为保护内皮细胞的相关疾病提供新的治疗方法与应用。 

磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用来检测细胞增殖情况。SRB是一种粉红色阴离子染料，易溶于水，在酸性条件下可特异性地与细胞内组成蛋白质的碱性氨基酸结合；在540nm 波长下产生吸收峰，吸光值与细胞量成线性正相关，故可用作细胞数的定量检测。SRB染色后不会像MTT法那样很容易变色，细胞固定染色后在96孔板中可以放置较长时间，因而受测定时间的影响较小。用Tris-base溶液溶解的SRB也可稳定较长时间。因此不同时问点固定的96孔细胞培养板可在同一时间测定，测定的吸光值结果不会受到明显影响。吸光值与SRB浓度作图时，在OD单位1.5-2.0以下为线性，当超出线形范围时，最好稀释后重新读数。虽然SRB法比其他检测方法操作步骤繁琐，但是由于时间可以自己掌握，不受限制，因此适用于高通量筛选。 

细胞划痕法是测定细胞的运动特性的方法之一，其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。 

基质胶(Matrigel)又名EHS(Engelbreth-Holm-Swarm)提取物、基底膜基质，是从小鼠EHS肿瘤中提取的可溶的、无菌的基底膜蛋白。Matrigel在4℃为液态，37℃凝固为固态，适用于将细胞或其它物质混合于其中进行皮下注射。该填塞实验广泛地应用于评估血管生长因子实验，以及肿瘤细胞诱导血管形成的实验。由于Matrigel中不包含任何组织成分，避免了组织中可能含有的促进和抑制血管新生物质对实验因子的影响。 

发明内容