[发明专利]一种采用大孔树脂分离制备合欢皮皂苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用大孔树脂分离制备合欢皮皂苷的方法。

背景技术

合欢属Albizzia为豆科含羞草亚科植物，是Albizzia julibrissin Durazz的树皮，是我们常用的传统中药，具有解郁安神、活血消肿之功效，传统上用于治疗心神不安，忧郁失眠，跌打伤痛，肺痈疮肿等。

现阶段，人们对合欢皮不同化学组分进行药理学研究，发现合欢皮的多种药理作用：①镇静安神作用：合欢皮属养心安神药，长期临床使用证明其有显著的宁心安神作用，对精神刺激所致失眠疗效较佳。②抗抑郁作用：临床方剂合欢汤具有解郁作用，其作用机理与兴奋大脑皮层有关。③抗生育作用：其茎皮的水提物有增强节律和收缩多种动物和人的子宫肌条、抗早孕和终止中期妊娠以及杀伤精子的作用。④抗肿瘤作用：其茎皮醇提取液中能有效地抑制Yoshida肿瘤，体外具有较强的肿瘤细胞毒活性。其中，根据文献报道，用乙醇回流方法提取合欢皮，提取物中含大量皂苷类物质，很多药理学实验证明，该方法提取出的提取物(主要成分为皂苷)，具有抑制小鼠实体瘤生长及体外抑制肿瘤细胞生长的作用。本发明在前期实验的基础上，探讨合欢皮乙醇回流提取后大孔吸附树脂分离皂苷的工艺参数，确定合理有效的纯化路线。

大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，其特点表现在：稳定性好，受pH、温度及其他因素影响小，分离量大，树脂可重复利用，工艺容易放大等方面。大孔吸附树脂分离法在对中药及其复方中对有效部位或有效成分的提取、分离、纯化、富集过程中，显示出独特的作用，已经广泛应用在中药的皂苷类、黄酮类、生物碱类等有效成分或有效部位的制备工艺中。影响大孔吸附树脂分离效率的因素很多，包括：树脂型号、树脂用量、树脂预处理方法、树脂柱径高比、吸附方式、pH值、吸附样品的浓度、提取液中被分离化合物极性强弱及分子量大小差异、洗脱液的种类与浓度、洗脱流速等。

发明内容

本发明的目的是提供一种运用大孔树脂色谱法分离制备合欢皮皂苷的方法。

本发明的技术方案：

所述运用大孔树脂分离制备皂苷的方法，制备合欢皮乙醇提取物，经D₁₀₁型号大孔吸附树脂分离，其径高比为1∶5，样品吸附时间为2h，依次采用蒸馏水、30％乙醇、70％乙醇溶液各3倍体积洗脱，洗脱流速为1.5mL/min，收集70％乙醇洗脱流份，回收乙醇，冷冻干燥即得合欢皮总皂苷冻干粉。

附图说明

图1是不同型号大孔树脂静态吸附实验结果；图2是不同型号大孔树脂静态洗脱实验结果；图3是静态吸附时间考察结果；图4是动态吸附解析考察结果；图5是乙醇洗脱液体积考察结果；图6是乙醇洗脱剂浓度考察结果；图7是流速考察实验结果；图8是径高比考察实验结果。

具体实施方式

实施例1：合欢皮乙醇提取物的制备

称取合欢皮，加入60倍量70％乙醇，加热回流提取2次，每次2.5h，合并浓缩得合欢皮提取液，冷冻干燥备用。

实施例2：大孔吸附树脂型号的确定

称取合欢皮乙醇提取物冻干粉溶于蒸馏水，配制1.617mg/mL溶液。大孔吸附树脂AB-8、D₁₀₁、D₂₀₁、D₃₀₁四种型号分别用95％乙醇浸泡24h，湿法装柱，95％乙醇淋洗5BV，去离子水淋洗5BV，备用。分别称取2g预处理好的树脂，置于100mL三角瓶中，在室温下分别加入合欢皮乙醇回流提取物冻干粉溶液(1.617mg/mL)7mL，摇匀使其达到充分吸附，室温下静置。分别于4，8，12，16，20，24h吸取上清液，回收溶剂，重新用蒸馏水溶解，检测各总皂苷含量。按下式计算树脂吸附率：

总皂苷含量的测定：等体积无水乙醚萃取三次，合并水相，等体积水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇相，回收溶剂，甲醇溶解残渣并定容至10mL，4℃保存备用。准确吸取0.1mL溶液于比色管中，加入0.3mL 5％香草醛-冰醋酸溶液和0.8mL高氯酸，60℃反应30min，再加冰醋酸定容至5mL，测定溶液0D₅₆₀。齐墩果酸对照品在0.02～0.2mg范围内与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为y＝8.9742x+0.0551，(R²＝0.9971)，计算各组样品的总皂苷含量。

以上样品溶液过滤除去上清液，树脂均用20mL 95％的乙醇浸泡室温下浸泡2h，每隔5min振摇10s，充分解析后过滤得到上清液，检测其总皂苷含量。按下式计算解吸率：