[发明专利]专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法

权利要求书

1. 一种专性孤雌繁殖的轮虫种群培育方法，其特征在于按如下步骤进行：

a．取轮虫的休眠卵放置于500毫升的培养液中，置于温度24度，光照3000lx，光周期16：8的环境条件下孵化3~5天；

b. 将孵化出来的轮虫进行单个体扩大培养，投喂微绿球藻，投喂密度为100万细胞~200万细胞/毫升培养液，温度24度，光照3000lx，光周期16：8；

c. 挑取100只新孵化出的个体分别进行扩大培养，形成100个克隆种群，每个克隆种群培养液体积为2000毫升，每天更新一次培养液及饵料； 

d．当克隆种群的轮虫密度达到1只/毫升时，向各克隆种群培养液中加入α-生育酚，加入量为20微克/毫升培养液，继续进行扩大培养，同时每天更新一次培养液及饵料，并维持培养液中α-生育酚的浓度；当克隆种群的轮虫密度达到3~10只/毫升，将每个克隆种群的轮虫密度浓缩至100只/毫升，同时调整α-生育酚的浓度为100微克/毫升培养液，培养10~15天；

e. 从100个克隆种群中，筛选出25~35个有性生殖比率小于1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 μWcm^-2s^-1的紫外线照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到1只/毫升，培养7天，此期间不添加α-生育酚；

f．重复d步骤的方法培育；

g．从25~35个轮虫的克隆种群中，继续筛选出10~15个有性生殖比率小于0.1%的克隆种群，用脉冲频率2450M的微波辐射10秒；12小时后再用强度为1480 μWcm^-2s^-1的紫外线照射60秒；12小时后，将克隆种群的轮虫群密度调整到1只/毫升，培养7天，此期间不添加α-生育酚；

h.重复d步骤的方法培育；

i. 从10~15个轮虫的克隆种群中，筛选出种群密度达到800~1000只/毫升仍进行孤雌繁殖的轮虫克隆种群。