[发明专利]检测呼吸道合胞病毒的免疫检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及利用杂交瘤技术生产单克隆抗体和相应的免疫检测试剂及试剂盒。 

背景技术

呼吸道合胞病毒(RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体，可引起严重的呼吸道疾病，感染后与其他呼吸道感染有相似的临床表现和X线胸片特征，不易鉴别。十年来呼吸道合胞病毒肺炎及毛细支气管炎占我国婴幼儿病毒性肺炎第一位，其症状与副流感病毒肺炎、轻症流感病毒肺炎及轻症腺病毒肺炎临床上几乎无法区别。重症流感病毒肺炎及重症腺病毒肺炎则高热持续，中毒症状及呼吸道症状重叠，临床表现却远较合胞病毒肺炎严重。合胞病毒肺炎其临床症状与一般支气管肺炎有相似之处，但与轻症腺病毒肺炎亦较难区别，确诊需结合病毒检查结果综合考虑，所以研究敏感快速的针对RSV病毒的检测方法，可以使检验室出具及时准确的病原检测报告，使临床医师及时明确病因，采取特异性针对性的治疗方案，避免滥用抗生素，而且可以便于早期及时诊断后立即加强患者管理，有效预防医院交叉感染，减少病毒传播。 

目前，临床上RSV的检测方法很多，常见的有直接免疫荧光法、间接免疫荧光法、桥联酶标免疫法、普通酶联免疫法、病毒分离法、PCR法及核酸杂交法等。主要使用的是荧光定量PCR法，该方法主要优点是灵敏度高，特异性好。但是缺点是操作复杂，需特定的仪器设备和操作间，且操作易污染，造成结果不如免疫方法直接检抗原可靠。而免疫诊断方法通过特异性直接检抗原，结果更可靠、特异性好，操作简便，无需特殊的仪器设备，普通实验室都可操作，易于基层单位推广和应用。它的主要缺点是不如荧光定量PCR高。因此研发高质量的单抗并制备相应的成试剂盒，使其拥有荧光定量PCR试剂同样的灵敏度和特异性，并且兼有上述免疫诊断试剂的优点，完全能满足临床对该病毒诊断的需求具有非常重要的实用价值。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测呼吸道合胞病毒(RSV)的检测试剂，包括： 

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体1，由保藏编号为CCTCC C2012154的杂交瘤细胞株制备； 

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体2，由保藏编号为CCTCC C2012155的杂交瘤细胞株制备。 

进一步地，上述抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体1为包被抗体；抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体2为生物素标记抗体。 

进一步地，上述检测试剂还包括亲和素-HRP。 

本发明的另一个目的是提供包括上述抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体1和抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体2的检测试剂盒。 

进一步地，所述试剂盒还包括亲和素-HRP。具体地，所述试剂盒的原理是用保藏编号为CCTCC C2012154的杂交瘤细胞株制备的抗RSV单克隆抗体包被的微孔板和用生物素标记由保藏编号为CCTCC C2012155的杂交瘤细胞株制备抗RSV单克隆抗体，形成双抗体夹心法检测RSV病毒的NP抗原，利用亲和素酶放大反应，从而高灵敏度和特异性地检测咽拭子抽提液中的RSV病毒。 

本发明的又一个目的是提供一种检测呼吸道合胞病毒的方法，包括将待测样品与上述的检测试剂接触，从而检测样品中的呼吸道合胞病毒。 

进一步地，还提供了使用本发明的检测试剂盒来检测样品中的呼吸道合胞病毒的方法。 

本发明所述的检测试剂和方法具有较高的灵敏度和特异性，便于临床推广使用，能完全满足临床对RSV病毒诊断的需要。 

生物材料的保藏

分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞命名为KRSV2和KRSV5，于2012年10月25日提交到CCTCC保藏，保藏号为：CCTCC C2012154和CCTCC C2012155。 

具体实施方式

以下实施例有助于进一步了解本发明的优点和特点，不应视为对本发明的限制。所使用的实验材料和试剂如无特别说明，均为普通市售。 

【实施例1】RSV单克隆抗体的研制和配对筛选 

1.免疫和筛选用抗原的制备 

为研制RSV单克隆抗体，从该病毒蛋白组学分析，本发明选择该病毒相对保守且含量相对较高的NP(核衣壳)蛋白作为诊断的目标蛋白。 

1.1用大肠杆菌表达RSV的NP蛋白并纯化：将RSV的NP蛋白基因通过PET30a质粒转入大肠杆菌表达，产物用HIS柱层析亲和纯化，用作免疫用抗原。具体方法和过程参见文献(地区人呼吸道合胞病毒核蛋白基因的序列分析及原核表达，病毒学报，CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY 2007.06.vol.23459-465)。