[发明专利]一种微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法

权利要求书

1.一种利用微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法，其特征在于：所使用的生产菌为Catenulispora acidiphila，菌株保藏号是DSM 44928，其工艺如下：

(1)培养基：种子和发酵培养基中的营养采用碳源和氮源，其中碳源可为葡萄糖、淀粉、糊精、饴糖，氮源可为蛋白胨、花生粉、黄豆粉、牛肉膏、鱼粉，此外还需添加无机盐；

(2)发酵工艺：使用该生产菌株，可通过摇瓶二级发酵的方法，获得其代谢产物二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯，具体过程包括：原始菌种的活化、摇瓶种子的制备、摇瓶发酵；

摇瓶种子的制备：灭菌前培养基为自然pH，接菌环接种生产菌株，转数180-210rpm，温度为25-28℃，培养时间4-5天；

摇瓶发酵工艺为：灭菌前培养基为自然pH，按照5-10％的接种量(以发酵体积为基准)接种，转数180-210rpm，温度为25-28℃，培养时间11-13天；

(3)发酵后处理：发酵液和菌丝体经离心、提取、分离得二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯。

2.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵制备二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯的方法，其特征在于，其发酵后的处理工艺如下：

发酵液放瓶后，在室温、常压下，使用转速4000rpm的离心机离心10分钟，收集菌丝体，加入10倍量的80％丙酮水溶液，超声提取30分钟，该过程重复三次，合并提取液减压浓缩得水相，水相经等体积的乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯层经减压浓缩得粗提物，后经硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相高效液相制备色谱得到纯品二苯基甲烷二氨基甲酸甲酯。