[发明专利]双抗体组织细胞蛋白定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织细胞蛋白定量检测方法，特别涉及一种采用双抗体法对组织细胞蛋白进行定量检测的方法。

背景技术

组织细胞蛋白表达水平是确定组织细胞是否发生病变以及如何进行有效治疗的一项重要参数。以肿瘤治疗为例，由于药物作用范围广泛，在杀死肿瘤细胞的同时，也杀死了大量的正常细胞，导致了难以忍受的毒副作用。随着医学研究的快速进展，科学家们逐渐开发出了针对性强、毒副作用小的肿瘤靶向治疗药物。目前，这种靶向治疗由于治疗作用好、毒副作用小越来越成为肿瘤治疗的发展趋势。然而，如何能够在临床中快速、准确的判断患者肿瘤的分子类型，进而确定该患者是否适用于某种靶向治疗方案仍是目前医学界急需解决的一个难题。

以乳腺癌为例，我国每年有20余万妇女患乳腺癌。其中，大约20％-30％的乳腺癌患者为人类表皮生长因子受体-2(HER2)阳性乳腺癌。乳腺肿瘤患者HER2阳性意味着乳腺肿瘤细胞表面的HER2蛋白数量增多，过度传递信号，刺激癌细胞疯狂增殖。HER2阳性的患者同其他乳腺癌病人相比，肿瘤恶性程度更高，进展更快，更容易复发和远处转移，且此类病人通常对内分泌治疗不敏感，预后较差。故几家国际制药公司研发出针对HER2阳性乳腺癌的靶向治疗药物，如赫赛汀，收到了比较好的治疗效果。然而，这类靶向药只对HER2阳性的乳腺癌患者有效，对于70％-80％HER2阴性的患者却没有任何治疗效果，如果在治疗前不及时诊断明确，不仅耽误了治疗，还会给患者背负沉重的经济负担(治疗费用)。因此，如何在最短的时间里对乳腺癌患者肿瘤组织中HER2表达水平(阴性或阳性)作出准确判断对于其靶向治疗意义重大。

目前乳腺癌人类表皮生长因子受体-2(HER2)检测一般采用免疫组织化学(IHC)检测HER2蛋白表达水平。虽然免疫组化(IHC)已经经过了FDA批准，但不同的检测方法、计算的准确性和试剂的选择都会影响HER2检测的结果。美国的一项调查结果显示，近1/4患者是因检测结果不准确而接受了不恰当的治疗。IHC检测HER2蛋白过度表达的错误率平均为18％，FISH检测HER2基因扩增的错误率在13％。因此，我国病理学家根据国内外最新的研究数据讨论后达成共识，于2006年10月制订发布了我国《乳腺癌HER2检测指南》。美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医学院(CAP)也于2006年12月11日联合发布了《乳腺癌HER2检测的ASCO/CAP指南共识》。这些指南强调了检测中易出现误差的环节、内部及外部质量控制和保证程序，旨在使HER2检测的操作程序和对结果判读的标准化，提高HER2检测的可重复性和准确性，更准确地筛选出适用于曲妥珠单抗(赫赛汀)等药物治疗的乳腺癌患者，避免无效治疗，使患者承受不必要的经济负担。

所以，开发出一种能够对组织细胞蛋白平进行快速、准确检测的技术，不仅在胶体免疫检测技术中属于一种突破性进展，具有重要意义，而且也具有广泛的市场应用前景。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种采用双抗体法，可快速对组织细胞蛋白进行定量检测的方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种双抗体组织细胞蛋白定量检测方法，其包括如下步骤：

1)设置一试纸条，所述试纸条上设有样品垫、金标垫、检测区和吸附垫；

2)利用胶体金或胶体银与检测蛋白的单抗或多抗偶联，并将偶联后形成的胶体金或

胶体银抗体复合物滴加于金标垫上，烘干后阴凉保存；

3)将另外一种抗被检测蛋白的单抗或多抗固定在检测区上；

4)待检测区显色后，根据显色区域判断该被检测蛋白的表达是阳性还是阴性。

优选地，所述检测区上设有数个检测圆点。

优选地，所述检测圆点呈阵列状分布

如上所述，本发明的双抗体组织细胞蛋白定量检测方法具有以下有益效果：该检测方法分别在金标垫(或银标垫)及检测区上分别使用被检测蛋白的两种不同特异性单克隆或多克隆抗体，并通过读取显色的检测圆点的数量就可快速判读组织细胞中检测蛋白含量的高低来确定该检测蛋白的表达水平。

附图说明

图1为本发明试纸条的主视图。

图2为本发明试纸条的俯视图。

元件标号说明

1                        底板

2                        聚脂膜

3                        样品垫