[发明专利]一种防治自然流产的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种防治自然流产的单克隆抗体及其应用。

背景技术

自然流产是妊娠早期常见的并发症，发生率约占全部妊娠的15-20%。近年来，自然流产率在全球呈现了逐年上升的变化趋势，引起国内外学者的深切关注。由于我国的人口基数大，其中育龄夫妇的数量尤为可观，以2007年的统计数据为例，育龄妇女的人数约为3.61亿，而在妊娠早期发生自然流产者远远超过100万。因此深入研究女性自然流产发生的机制开始成为预防医学领域疾病早期防治的一个热点研究内容。

近年来研究显示细胞凋亡在胚胎着床、胎盘的发育老化以及胎儿的生长发育中具有重要作用。各种原因所致的自然流产最终是以细胞凋亡实现的。目前，细胞凋亡在妊娠中的作用日益受到重视，越来越多的研究表明正常妊娠过程中胎盘、蜕膜的凋亡和增殖处于一种平衡状态，一旦发生异常凋亡，平衡状态被打破就可能导致病理妊娠，引发自然流产的发生。

gC1qR是补体C1q受体，由于日本学者发现gC1qR可介导单核细胞的凋亡，且能够锚定在线粒体上影响单核细胞的功能，在多种细胞凋亡中发挥关键作用。C1q-gC1qR复合体在哺乳动物细胞的正常通讯中起抑制作用的观点是近年来提出的新理论。近年来，单克隆抗体在疾病的诊断和治疗预防方面特异性强，灵敏度高，显示了非常明显的优越特性。但是，目前尚没有gC1qR单克隆抗体对自然流产有何种影响的报道，也没有利用gC1qR单克隆抗体制备防治自然流产的药物上市。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题提供一种防治自然流产的单克隆抗体。

本发明还有一个目的是提供上述单克隆抗体在制备防治自然流产的药物中的应用。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

一种抗自然流产的单克隆抗体，该单克隆抗体为gC1qR单克隆抗体。优选该gC1qR单克隆抗体为美国Millipore公司货号为AB2991的产品。

gC1qR单克隆抗体在制备防治自然流产药物中的应用。

gC1qR单克隆抗体在制备抑制滋养层细胞凋亡的药物中的应用。

本发明证明了gC1qR单克隆抗体具有防治自然流产的功能，可用于制备防治自然流产的药物。以下是更为详细的说明。

在我们实验结果中显示：自然流产患者其蜕膜组织中滋养层细胞凋亡明显，且电镜下有凋亡小体形成，而细胞膜、细胞器却相对完整，呈现细胞凋亡的典型特征（见图1、2）。

我们采用Western blot技术对自然流产者蜕膜组织中gC1qR蛋白表达进行检测，结果发现其gC1qR蛋白表达水平显著上调（见图3）。据此，我们提出科学问题：自然流产的机制由C1q-gC1qR复合体致线粒体功能损伤的机制介导，gC1qR基因在自然流产患者体内表达显著上调可通过线粒体功能障碍的机制，导致滋养层细胞凋亡，最终引发流产。应用gC1qR单克隆抗体（gC1qR monoclonalantibody,gC1qR mAb）封闭gC1qR，使C1q和gC1qR的结合受阻，从而抑制了C1q-gC1qR复合体致线粒体功能损伤，减少了滋养层细胞的凋亡，有效降低自然流产的发生率。

我们以体外培养的胎盘滋养层细胞株HTR-8/SVneo为研究工具，探索gC1qR mAb对滋养层细胞凋亡的影响。结果发现：①gC1qR mAb干预滋养层细胞后，滋养层细胞凋亡显著减少（见图4）；②GFP-gC1qR vector干预滋养层细胞后，电子显微镜下观察发现细胞中线粒体数量减少，嵴断裂、减少、消失，部分线粒体肿胀，甚至呈空泡状；荧光定量PCR检测发现细胞中线粒体拷贝数显著减少，荧光探针H₂DCFDA（2',7'-Dichlorofluorescein diacetate，2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐）检测发现细胞内活性氧ROS含量显著升高（见图5A-5C），而gC1qR mAb组，上述滋养层细胞线粒体形态、数量、功能无显著改变。

分析上述结果可见：①GFP-gC1qR vector干预下发现滋养层细胞株HTR-8/SVneo中gC1qR蛋白表达量明显上调的同时也获得了线粒体形态、数量、功能变化的实验结果；②gC1qR单克隆抗体干预不但抑制了滋养层细胞株HTR-8/SVneo的凋亡，而且线粒体功能受损显著减少，进一步为gC1qR单克隆抗体防治自然流产发生的机制提供了支持依据。