[发明专利]一种大蒜伤愈组织种子细胞的生产方法

权利要求书

1. 一种大蒜伤愈组织种子细胞的生产方法，其特征在于，通过以下工艺步骤实现：

A、将大蒜在5-7℃下贮藏25-30天，然后去除保护叶，用无菌水冲洗带皮的蒜瓣，用70%的乙醇漂洗40-60秒，再放入0.1%的升汞溶液中浸泡7-10分钟；

B、将A步骤所得蒜瓣用无菌水冲洗2-3遍，然后将蒜瓣切成3-8块（视自然蒜瓣的大小而定）的带皮蒜块，尽量做到大小均匀，接种到盛有30ml伤愈组织诱导培养基的三角瓶中，每瓶20-30块；

C、将B步骤的三角瓶在24-26℃、光照强度500-700lux的条件下培养，每天循环光照11-14小时，14-16天，备用；

D、将C步骤所得大蒜伤愈组织细胞按接种到悬浮培养基中进行培养，接种比例按一个三角瓶接种5-8L悬浮培养基；

E、将D步骤接种后的悬浮培养基在25-30℃，pH值在5-6，培养6-8天；

F、将E步骤的培养清液按1：10的比例，移种至同样的悬浮培养基中，以25-30℃，pH值在5-6，培养6-8天；

G、重复F步骤3-5次，取样在显微镜下观察细胞形态，当细胞形态整齐一致，且为圆形或椭圆形，即为成品种子细胞。

2. 如权利要求1所述的一种大蒜伤愈组织种子细胞的生产方法，其特征在于，所述B步骤中伤愈组织诱导培养基的配比为：蔗糖3%，琼脂0.8%，pH值为6.8，再添加2ppm的2,4-二氯苯氧乙酸和0.1ppm的6-糠基氨基嘌呤。

3. 如权利要求1所述的一种大蒜伤愈组织种子细胞的生产方法，其特征在于，所述D步骤的悬浮培养基的配比为：蔗糖1-3%、葡萄糖1-2%、硝酸钾0.1-0.15%、硝酸铵0.15-0.22%、酪蛋白水解物0.02-0.04%，配好后再加入1ppm的甘氨酸和0.2ppm的泛酸钙。