[发明专利]一种检测大米脂肪中脂肪酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种脂肪酸的分析检测方法，具体涉及一种大米脂肪中脂肪酸的检测方法。

背景技术

脂肪是大米的重要成分，而大米脂肪的主要成分是不饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸对人体有诸多益处，具有缓解血液中过量的胆固醇、增强细胞膜透性、阻止心肌组织和动脉硬化等功能。由于脂肪的劣变速度很快，容易发生水解使游离脂肪酸增多，而不饱和脂肪酸容易发生氧化而造成不饱和脂肪酸的减少，从而导致陈化的大米往往酸度增高、香味散失。因此，大米脂肪的脂肪酸的含量和组成可作为大米品质的评价手段。作为啤酒生产中常用的辅料，大米具有降低啤酒生产成本、调整麦汁组分等意义。脂肪酸尤其不饱和脂肪酸对酵母的发酵性能和啤酒品质的影响非常大；因此，测定大米脂肪酸对生产高品质的啤酒有一定的指导意义。

现有技术中有多种手段可用于检测大米脂肪中的脂肪酸，脂肪酸甲酯化可降低汽化温度，提高分离效果，有利于气相色谱法分离并逐一测定其组成和含量。目前，在油脂的甲酯化分析中经常采用的有两种手段：（1）将油脂分解成脂肪酸再进行甲酯化；（2）直接把油脂和甲醇进行醇解反应得到甲酯化产物。第一种方法一般是在乙醇液中皂化后，再用无机酸酸化分解，最后用乙醚提取分解出的游离脂肪酸，然后对脂肪酸进行甲酯化。第二种方法常用的有三氟化硼甲酯化法、碱法甲酯化法和酸法甲酯化法，其中三氟化硼催化甲酯化率高，但其毒性强，不易保存，不利操作者使用；酸催化甲酯化油脂则具有反应慢、甲酯化率低以及要求温度高等特点，不适合用于固相微萃取技术。因此，多数方法都或多或少采用了有机溶剂，并且步骤繁琐。回瑞华等利用索氏抽提或有机溶剂提取脂肪后，再进行甲酯化进样，采用GC-MS或GC-FID分析大米油脂的脂肪酸（不同产地稻米油脂中脂肪酸的气相色谱-质谱分析，质谱学报，2008，29(6)：349~352）。该方法不但采用了有机溶剂，还必须先将脂肪从待测大米中提取出来，步骤过于繁琐。此外，有研究者向大米直接加入酯化试剂甲酯化，然后添加过量NaCl、水和石油醚分层，将上层液体除水后在氮气的保护下浓缩得到脂肪酸甲酯，最后进样GC-FID分析检测（Chemical Composition and Fatty Acid Analysis of Saudi HassawiRice Oryza sativa L.，Pakistan Journal of Biological Sciences，2002，5(2)：212~214）。该方法避免了脂肪酸的提取步骤，但仍然采用了大量的有机溶剂，而且还要在氮气的保护下浓缩，步骤仍然繁琐，测样时间长，满足不了实际生产中大量检测的需要。

专利201110462886.8公开了“瓶内甲酯化-顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用测定啤酒中游离脂肪酸的检测方法”，该方法采用了酸催化甲酯化法对样品进行瓶内甲酯化。然而，大米中脂肪含量高，游离脂肪酸少，因此该法采用的酸催化甲酯化法不适用于大米中脂肪酸的分析。由于作为甲酯化试剂的甲醇具有易挥发的特点，因此甲酯化反应在顶空瓶内发生时，甲醇进入顶空部分，导致脂肪酸甲酯化率降低，并影响萃取效果，甚至会发生萃取头对挥发性物质和甲醇的竞争性吸附，不利于脂肪酸甲酯的富集。另外，现有技术中很少有定量检测脂肪酸的报道，其中有文章报道采用内标法定量测定油脂脂肪酸的检出限仅为4.0mg/L（毛细管气相色谱内标法测定沙棘油中的脂肪酸，中国粮油学报，2008，23(1):198~202）。

本发明中甲酯化反应以水为基体，甲醇水溶液大大降低甲醇对萃取头的不利影响，碱催化脂肪生成脂肪酸甲酯，之后进入顶空部分，固相微萃取通过涂布在石英纤维表面的高分子涂层完成对脂肪酸甲酯的萃取和预富集，解吸之后利用GC-MS-MS进行分离检测。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述问题，提供了一种检测大米脂肪的脂肪酸方法，该方法使用溶剂少，步骤简单，检测准确度高，能快速有效测定大米脂肪酸。

本发明的技术方案：一种检测大米脂肪中脂肪酸含量的方法，大米样品借助于多功能进样器在顶空瓶内碱催化甲酯化和固相微萃取同时进行，之后进入气相色谱-串联质谱联用仪（GC-MS-MS）检测并定量分析大米脂肪中脂肪酸含量。

本发明包括以下步骤：

①仪器参数的设置：

a.多功能进样器：温度60℃，时间60min，采用85μm PA萃取头；