[发明专利]一种质粒型腺病毒载体pAd-IGF2及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201210525343.0 | 申请日： | 2012-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN103205462A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 陈宏;黄永震;孙雨佳;展召阳;李密杰;蓝贤勇;雷初朝 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/66;C12Q1/68;C12N5/10 |
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| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 病毒 载体 pad igf2 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种质粒型腺病毒载体pAd-IGF2，其特征在于：所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2含有如SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的秦川牛IGF2基因。
2.如权利要求1所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2，其特征在于：所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2是由秦川牛IGF2基因通过AdEasyTM系统构建所得。
3.如权利要求1所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2，其特征在于：所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2中的IGF2基因连接于穿梭质粒CMV启动子之下。
4.如权利要求1所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2，其特征在于：所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2中的IGF2基因起始密码子前含有Kozak序列。
5.如权利要求1所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2，其特征在于：所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2中的IGF2基因起始密码子后含有6个His标签序列。
6.构建权利要求1至6中任一权利要求所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)、将PCR扩增的IGF2基因片段连接到pGM-T载体，重组质粒pGM-T-IGF2和穿梭质粒pAdTrack-CMV分别经Kpn I和HindIII双酶切，将IGF2基因片段和pAdTrack-CMV载体片段利用T4DNALigase进行酶连反应，酶连产物转化E.coli DH5α感受态细菌，得到pAdTrack-CMV-IGF2重组质粒；
(2)、限制性内切酶Pme Ⅰ线性化pAdTrack-CMV-IGF2重组穿梭质粒，用线性化pAdTrack-CMV-IGF2重组穿梭质粒转化含有pAdEasy-1质粒E.coli BJ5183感受态细菌，利用E.coli BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-IGF2和pAdEasy-1的同源重组，获得同源重组成功的携带IGF2基因的重组腺病毒质粒pAd-IGF2。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将重组腺病毒质粒pAd-IGF2用脂质体LIPOFECTAM INE2000转染后，在293A细胞中进行病毒包装。
8.权利要求1至5中任一权利要求所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2作为秦川牛IGF2基因功能鉴定的应用。
9.如权利要求1至5中任一权利要求所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2作为细胞改造的应用。
10.如权利要求1至5中任一权利要求所述的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2作为肌肉生长发育调控的应用。
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