[发明专利]一种异养硝化好氧反硝化细菌及其培养和应用

权利要求书

1.一种能够高效脱氮的异养硝化-好氧反硝化细菌，属于不动杆菌属(Acinetobacter)，其命名为Acinetobacter sp.Y1；保藏登记号为CGMCC NO.6563，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间为2012年9月14日。

2.根据权利要求1的细菌的分离方法，其特征在于，其分离方法如下：

步骤一、采集样品及富集培养

从煤气化公司焦化废水处理厂的第一曝气池中采集活性污泥；取20mL活性污泥接种于装有180mL牛肉膏蛋白胨培养基的500mL三角瓶中，在120rpm、30℃下摇床富集培养1周；

步骤二、分离纯化

用生理盐水将经富集后的培养液按照体积比依次稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9和10^-10的菌悬液，取0.1mL稀释好的菌悬液涂布于异养氨化培养基的平板上，在30℃下恒温培养；随后挑选长出100个单菌落的平板，将各单菌落接种于异养氨化液体培养基中，在120rpm、30℃条件下培养；培养期间每天用纳氏试剂、格里斯试剂及二苯胺检测NH₄⁺-N剩余量、NO₂^--N及NO₃^--N的积累量进行硝化活性确认，同时作空白对照；对有效降解NH₄⁺-N的培养液再次进行梯度稀释、平板分离，最后纯化得到本发明的菌株Acinetobacter sp.Y1；采用异养硝化培养基对该菌株进行菌种保藏；

所述的牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，pH 7.0，蒸馏水1000mL，pH 7.0；

所述的异养氨化培养基为：NH₄Cl 0.382g，结晶乙酸钠2g，MgSO₄·7H₂O 0.05g，K₂HPO₄0.22g，NaCl 0.12g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，FeSO₄0.01g，H₂O 1000mL，pH 7.0；

所述的异养硝化培养基为：(NH₄)₂SO₄0.47g，柠檬酸钠4.9g，MgSO₄·7H₂O 0.05g，K₂HPO₄0.22g，NaCl 0.12g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，FeSO40.01g，H₂O 1000mL，Ph7.0；

在上述培养基制作平板或斜面等固体培养基时，在其液体培养基中添加1.5-2％的琼脂即可。

3.一种根据权利要求1所述细菌的培养方法，其特征在于，将异养硝化培养基斜面上保存的Acinetobacter sp.Y1接种于异养硝化培养液中，80～150rpm、30～37℃条件下恒温振荡培养；所述的异养硝化培养液为：碳源柠檬酸钠2.5～20.0g，氮源(NH₄)₂SO₄ 0.47～3.8g，其余成分为MgSO₄·7H₂O 0.05g，K₂HPO₄0.2g，NaCl 0.12g，MnSO₄·4H₂O 0.01g，FeSO40.01g，H₂O 1000mL，pH 6.0～9.0。