[发明专利]一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶及其制备方法

权利要求书

1.一种麦芽糊精底物特异性提高的环糊精糖基转移酶，以GenbankAF047363.1所示的环糊精葡萄糖基转移酶为出发序列，其特征在于第195位的酪氨酸突变成丝氨酸Y195S，第260位的酪氨酸突变成精氨酸Y260R，第265位的谷氨酰胺突变成精氨酸赖氨酸Q265K或其组合。

2.权利要求1所述的环糊精葡萄糖基转移酶，其特征在于环糊精葡萄糖基转移酶来源于软化类芽孢杆菌(Peanibacillus macerans)。

3.一种获得权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶的方法，其特征在于以Genbank AF047363.1公布的基因为出发基因,将第195位的酪氨酸突变成丝氨酸Y195S，第260位的酪氨酸突变成精氨酸Y260R，第265位的谷氨酰胺突变成精氨酸赖氨酸Q265K或将其组合进行双突变或三突变。

4.产权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶的基因工程菌或转基因细胞系。

5.权利要求4所述产环糊精葡萄糖基转移酶基因工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1）采用化学全合成或PCR方法克隆编码权利要求1所述环糊精葡萄糖基转移酶基因；

2）将步骤1）获得的环糊精葡萄糖基转移酶基因连接到大肠杆菌表达载体，得到重组表达载体；

3）将步骤2）获得的重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)得到基因工程菌。

6.权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述表达载体为pET-20b(+)。

7.应用权利要求4所述基因工程菌发酵生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法，其特征在于以产环糊精葡萄糖基转移酶突变体的基因工程菌为生产菌株，活化后按4%接种量将种子发酵液接到含100μg/mL氨苄青霉素的TB液体培养基；大肠杆菌在30℃摇床培养至OD₆₀₀=0.6，加入0.01mM终浓度的IPTG诱导胞外表达，并在25℃摇床继续培养发酵90h后，将发酵液于4℃、10000rpm离心20min除菌体，收集富含环糊精葡萄糖基转移酶的上清液。