[发明专利]稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱方法，特别涉及一种中药成分的含量测定技术。

背景技术

扶正解毒散是根据《中华人民共和国兽药典》2010版二部扶正解毒散项下规定，由黄芪、板蓝根和淫羊藿三味中药按一定比例组合超微粉碎而成的成方制剂，具有扶正祛邪、清热解毒的功效。主治鸡法氏囊病。但是其项下质量标准并未规定各有效成分的鉴别方法和含量测定方法。

为了完善扶正解毒散质量标准，为其质量标准的制定提供依据，本发明对扶正解毒散中黄芪的成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定方法的探索，并确定一种稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。

。

发明内容

本发明旨在解决扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定问题，以解决兽药典中未规定毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。

具体方法技术方案如下：

一种高效液相色谱法测定扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法，其色谱条件为：

a. 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；

b. 流动相为混合比例为20:80的乙腈和0.2%甲酸溶液；

c. 紫外检测器的检测波长为260nm。

d. 所用流动相流速为1ml/min；

e. 进样体积为10μl。

1. 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线的绘制

a. 标准品溶液的制备：精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品0.01042g，置于200ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至200ml。

b. 用甲醇稀释不同浓度的标准品溶液：精密量取原浓度标准品溶液5ml，加甲醇定容至10ml，混匀后，再精密量取5ml至另一容量瓶中，加甲醇定容至10ml，按照此方法倍比稀释，制成浓度分别为52.1μg/ml、26.05μg/ml、13.03μg/ml、6.51μg/ml、3.26μg/ml的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液。

c. 以不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液响应的峰面积对浓度作图，得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷的标准曲线。见附图。

2. 供试品的制备

取扶正解毒散约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3. 精密度试验

取供试品溶液，精密吸取10μl进样，重复5次，记录峰面积，计算该方法精密度。试验结果见表。

表 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法精密度试验结果

由结果可见，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的相对标准偏差为0.67%，表明本方法的进样精密度良好。

4. 方法的专属性试验

阴性样品溶液：精密称取除黄芪外扶正解毒散约1g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

5. 回收率试验

供试品溶液的制备：精密称取扶正解毒散约1g，6份，置圆底烧瓶中，分别加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

表 毛蕊异黄酮葡萄糖苷回收率试验结果

附图说明

图1 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线

图2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品液相色谱图

图3 扶正解毒散20120417液相色谱图

图4 扶正解毒散201200605液相色谱图

图5 阴性样品液相色谱图

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明。

按以下检测方法分别对批号为20120417和批号为20120605的扶正解毒散中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量检测。