[发明专利]胆碱酯酶检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物试剂，具体涉及一种检测试剂盒,尤其涉及一种胆碱酯酶检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

胆碱酯酶（cholinesterase）是一类糖蛋白，以多种同功酶形式存在于体内。一般可分为真性胆碱酯酶和假性胆碱脂酶。真性胆碱酯酶也称乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase），主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，特别是运动神经终板突触后膜的皱摺中聚集较多；也存在于胆碱能神经元内和红细胞中。此酶对于生理浓度的Ach胆碱酯酶作用最强，特异性也较高。一个酶分子可水解3×10分子Ach。假性胆碱酯酶（PCHE）存在于血清或血浆中，除可作用于乙酰胆碱外，还可作用于其他胆碱类化合物。当遇到肝脏合成功能下降，CHE（胆碱酯酶）和真性胆碱酯酶在血液中的浓度随之降低，其降低程度与肝脏合成功能损害程度呈正相关。真性胆碱酯酶将胆碱脂水解为胆碱和有机酸，临床上可以根据其水解产物的多少，来测算出CHE（胆碱酯酶）的活性。因此，胆碱酯酶在临床用途如下：

（1）肝脏疾病：胆碱酯酶是反映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标，在病情严重的肝炎患者中，其PCHE降低与肝病变程度成正比，与血清白蛋白平行；慢性肝炎、肝硬化、肝癌时如PCHE持续降低则提示预后不良；肝功能不全时PCHE明显降低。

（2）遗传性血清PCHE异常病、营养不良时血清PCHE均降低。

（3）肾脏疾病（排泄障碍）、肥胖、脂肪肝、甲亢和遗传性高PCHE血症者，血清PCHE水平均可升高。

（4）是协助有机磷中毒诊断及预后估计的重要手段。含有机磷的杀虫剂能抑制红细胞内真性胆碱酯酶和血清中的假性胆碱酯酶。有机磷中毒时血清PCHE降低检测方法：

硫代胆碱+5，5二硫代－2－硝基苯甲酸─────→5－巯基－2－硝基苯甲酸

由于丁酰硫代胆碱极不稳定，非常容易水解，有专利报道（CN100557423C）底物在酸性溶液中会稳定，但是实际使用过程中效果仍然不理想，长时间放置后底物依然很容易水解。Cholinesterase assayautomated in the Cobas-Bio centrifugal analyzer.ClinicalChemistry August 1987 vol.33no.8 1460-1462报道了稳定丁酰硫代胆碱的方法，包括充氮气，加保护剂等。然而，这些方法都不能彻底解决丁酰硫代胆碱水解的问题，底物在长时间放置后，还是会逐步水解，严重影响试剂的空白和灵敏度，从而最终影响检测结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计稳定底物的物质，提高试剂稳定性，用于检测胆碱酯酶的试剂。

本发明提供了一种胆碱酯酶检测试剂盒，该试剂盒由下列试剂1和

试剂2，按4份：1份的比例组成：

试剂1：（1L）（试剂体积）

试剂2：（1L）（试剂体积）

本发明的检测胆碱酯酶试剂盒，在使用时,先将试剂1加入检测样本后再加入试剂2,即可进行检测。

本发明的另一目的是提供了所述胆碱酯酶试剂盒的制备方法：该方法包括下列步骤：

(一)制备试剂1:（1L）（试剂体积）

（1）先向容器内加入为总量80%的去离子水；

（2）依次加入磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羟基亚乙基二膦酸、叠氮钠、5，5二硫代－2－硝基苯甲酸；

（3）最后加入剩余量的去离子水至总体积为1L混合均匀，即得;

(二)制备试剂2:（1L）（试剂体积）

向容器内依次加入酒石酸、羟基亚乙基二膦酸、亚硫酸钠、苯甲酸钠、丁酰硫代胆碱、乙二胺四乙酸、异丙醇，去离子水加至总体积为1L混合均匀，即得。

本发明人通过研究试验证实：由于本发明在试剂盒中加入了底物保护剂羟基亚乙基二膦酸和异丙醇,克服了现有技术使用乙二胺四乙酸作保护剂产生的缺陷，对试剂中的底物有很强的保护作用，尤其是随着时间的推移，对底物的保护作用更明显。本发明的试剂盒检测效果好，使用方便，还可降低医疗费用，有较大的临床应用价值。

具体实施方式

以下实施例所用试剂原料均通过市售得到。

实施例1制备胆碱酯酶检测试剂盒

组成:试剂1：（1L）（试剂体积）

试剂2：（1L）（试剂体积）

制备: