[发明专利]鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鸭病毒性肝炎病毒株，所述病毒株VP1基因编码氨基酸的序列包含如图六所示的具有49-T、196-N、207-E三个氨基酸取代位点和197-Q、198-S、199-D三个共有位点。

2.根据权利要求1所述的鸭病毒性肝炎病毒，所述的鸭病毒性肝炎病毒为鸭病毒性肝炎病毒SD1株，所述SD1株保藏地址为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.V201225。

3.一种DNA序列，它实质上含有seq No.1的核苷酸序列。

4.一种VP1抗原蛋白，所述的VP1抗原蛋白包含如图六所示的具有49-T、196-N、207-E三个氨基酸取代位点和197-Q、198-S、199-D三个共有位点的鸭病毒性肝炎病毒VP1共有序列。

5.一种鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体，其特征在于，所述二价蛋黄抗体包含鸭病毒性肝炎DHAV-1型和鸭病毒性肝炎DHAV-3型蛋黄抗体。

6.一种鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体的制备方法，所述制备方法包括：

(1)采用鸭病毒性肝炎DHAV-1型毒株和DHAV-3型毒株分别接种9日龄SPF鸡胚和10日龄易感鸭胚，然后收获尿囊液，将所述收获的病毒液按比例混合，甲醛灭活并制备疫苗；

(2)使用所述制备的疫苗免疫产蛋鸡，免疫后抽样测定鸡高免蛋黄中抗DHAV-1型、DHAV-3型抗原抗体中和效价≥1∶8192，之后收集所述鸡的高免蛋；

(3)将所述高免蛋蛋壳消毒，收集蛋黄，所述蛋黄加入等体积蒸馏水，搅拌混匀，低温巴氏灭活；酸化蒸馏水法提纯、辛酸法提纯；微滤，超滤。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述鸭病毒性肝炎DHAV-1型毒株为DRL-62株、所述DHAV-3型毒株为SD1株。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述低温巴氏灭活条件为62.5℃加热灭活30min。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述酸化蒸馏水法提纯步骤为：先在隔层反应罐中加入相当于所述蛋黄6倍体积的的灭菌蒸馏水，所述蒸馏水pH值为4.2，并降温至4℃，然后，将灭活的所述蛋黄液加入，搅拌，4℃静置4h，离心分离上清液；

所述辛酸法提纯步骤为：按所述上清液总量的0.2%体积加入辛酸，搅拌，室温放置4h，过滤至澄清，再按所述滤液总量的0.1%加入饱和甲醛溶液，搅拌，室温放置24h。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其中，所述微滤使用0.22μm微孔滤芯过滤除菌，所述超滤用截留分子量为1000KDa的超滤膜过滤除病毒。

11.根据权利要求5~10任一项中所述的鸭病毒性肝炎二价蛋黄抗体在制备预防和治疗鸭病毒性肝炎的药物中的应用。

12.一种预防和治疗鸭病毒性肝炎的疫苗组合物，所述疫苗组合物包括权利要求1或权利要求2所述毒株制备的抗原以及药学上可以接受的载体。