[发明专利]一种骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养方法及培养基无效
| 申请号： | 201210533944.6 | 申请日： | 2012-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN102978156A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 李静;周国顺;戴利成 | 申请（专利权）人： | 湖州市中心医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 赵芳;徐关寿 |
| 地址： | 313000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 骨髓 间充质 干细胞 体外 扩增 纯化 培养 方法 培养基 | ||
1.一种骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养方法，所述方法包括：取骨髓细胞，经筛网过滤后的单细胞悬液接种于培养皿中进行贴壁培养，初始接种密度2~5×106个/mL细胞培养基，培养3~5小时后首次更换细胞培养基，此后每隔8~15小时再次更换细胞培养基，直到接种后60~80小时，然后再每隔3天更换细胞培养基继续培养，直到细胞长至80%~90%融合，以胰酶消化，消化时间不超过2分钟，细胞传代继续培养，获得纯化的骨髓间充质干细胞；所述细胞培养基终浓度组成如下：bFGF 8~12 μg/L，EGF 8~12 μg/L，PDGF-BB 8~12 μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液、F12培养液或其混合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞培养基终浓度组成如下：bFGF 10 μg/L，EGF 10 μg/L，PDGF-BB 10 μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液和F12培养液体积比1:1的混合液。
3.一种用于骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养的细胞培养基，其终浓度组成如下：bFGF 8~12 μg/L，EGF 8~12 μg/L，PDGF-BB 8~12 μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液、F12培养液或其混合物。
4.如权利要求3所述的细胞培养基，其特征在于所述细胞培养基终浓度组成如下：bFGF 10 μg/L，EGF 10 μg/L，PDGF-BB 10 μg/L，胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，溶剂为基础培养基；所述基础培养基为DMEM培养液和F12培养液体积比1:1的混合液。
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