[发明专利]糖尿病病理演变前期CDKAL1基因的mRNA水平原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地说，是涉及与糖尿病病理演变mRNA表达改变(病理演变过程)的相关检测技术。 

背景技术

   2011年统计的最新数据显示全国已经确诊的糖尿病有9240万，糖尿病前期的人群有1.48亿。糖尿病并发症是一种常见的慢性并发症，是由糖尿病病变转变而来，后果相当严重，如足病（足部坏疽、截肢）、肾病（肾功能衰竭、尿毒症）、眼病（模糊不清、失明）、脑病（脑血管病变）、心脏病、皮肤病、性病等是糖尿病最常见的并发症，是导致糖尿病患者死亡的主要因素。糖尿病的病理生理变化是由于胰岛素分泌不足和组织糖利用障碍，导致血糖过高代谢障碍。糖尿病有原发性与继发性两种。原发性病因尚未清楚;，可能与遗传等因素有关，继发性见于慢性胰腺炎、癌症、血色病、胰大部分手术切除、脑垂体前叶机能亢进、促肾上腺皮质机能亢进、肾上腺嗜铬细胞瘤、胰岛α细胞瘤、妊娠糖尿病等。近来科学家们都把糖尿病的发病机制的放在基因病理生理学水平进行深入研究，发现了一些与糖尿病发病有关一些基因，如CDKAL1基因是近来发现与患糖尿病有关，发现CDKAL1蛋白在糖尿病患者体内的水平明显增高，研究人员认为这一指标可以通过简单的血液测试，指示正常体重的中年人患糖尿病的风险。这将给他们更强的动力来尽早改善生活方式，以预防糖尿病。临床上当患者被确诊为二型糖尿病时，往往这一疾病早已在患者体内发展了多年，而且已经对血管和眼部造成了伤害，及早筛查出糖尿病的早期风险是很有价值的，这样人们就可以尽早采取预防性疗法。

   本发明人在长期研究中发现，导致重大疾病死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期诊治。因此，开发出用于糖尿病发病前期的相关基因水平筛查试剂盒有非常大的临床价值。

 随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，疾病基因组学等研究的深入展开，为了寻求更早期的诊断糖尿病、治疗糖尿病、以及预防糖尿病，已取得长足进步。至今，我们已有可能在基因的一级转录功能产物mRNA水平上做更精确的早期筛查和诊断，在糖尿病前期做预测和筛查，这样就能将糖尿病的发病率降下来，可以大大降低社会成本，进一步提高国民的健康体质。

发明人在研究中发现用双标记技术，同步检测蛋白质与检测mRNA，有时候mRNA有表达，但蛋白质有时候没有转录出来，它们有时候存在表达时空不对应现象，检测mRNA会更准确。

本发明人在研究中发现CDKAL1基因在糖尿病患者、高危人群、正常对照人有明显的表达量变化，将CDKAL1作为筛查糖尿病病变前期有非常重要的临床意义。CDKAL1在糖尿病患者病变中高表达。他作于糖尿病预警有非常重要的临床意义。

发明人在长期的研究中，得出了一种新理念，重大疾病的临床诊治模式一定要改变，不能只停留现在治已病（发病后诊治），要做到预防性诊治，做到治已病，只有这样才能降低重大疾病的发病率和死亡率，降低社会成本和医疗成本。因此，发明人在开发和生产重大疾病的mRNA水平筛查试剂盒及治疗药物中，在理论和技术上都做了创新。特别是筛选临床标本（正常人群、高危人群、疾病患者），突破了正常组织与病理组织比较的一贯性研发思路，来寻找和开发病变前期的mRNA水平，与疾病早期基因病理生理学演变密切相关，而且临床意义非常重要mRNA靶标，将临床上疾病形成后诊治模式变成重大疾病的预防性诊治，争取了疾病诊治的时间和空间，达到预防疾病。

根据现有的文献资料采用原位杂交技术和组化免疫方法检测CDKAL1基因mRNA水平表达量的检测技术及试剂盒未见报道。

本发明人在针对创新性发明的要求，设计了（糖尿病患者、高危人群、正常对照）不同数据例组，用原位杂交技术进行检测，结果表明以上糖尿病病人高表达，高危人群有不同程度表达10-20%,正常对照都是不表达。表明CDKAL1基因是糖尿病病变前期筛查的重要标志物。

原位杂交技术（in situ hybridization）是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链（即探针），在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。