[发明专利]msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白转基因工程菌株。

背景技术

老年人骨质疏松发病率较高，全球有2亿骨质疏松患者，并且女性多于男性。根据世界卫生组织（WHO）的标准，美国国家健康和营养调查（NHANES Ⅲ，1988~1994年）结果表明，骨质疏松严重影响老年人生活质量，50岁以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他们的一生中都会出现骨质疏松性骨折，一旦患者经历了第一次骨质疏松性骨折，继发性骨折的危险明显加大。中国老年人居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7.1%。随着社会老龄化的进程，骨质疏松症的发病率呈上升趋势，预计到2050 年将增加到2.21亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，绝大部分在中国。有学者对1995~1996年美国骨质疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年发生数进行调查显示，每年发生骨质疏松性骨折150万次，其中椎体骨折70万次，腕部骨折20万次，髋部骨折30万次，其它骨折30万次。

肥胖与骨量关系临床观察表明，肥胖与骨密度(BMD)提高有关。肥胖是骨量的保护因素，超重和肥胖的妇女绝经后较同龄非超重妇女骨量高且骨丢失较慢。体重下降是绝经早期骨丢失的危险因素，提高体重指数可减缓绝经后骨丢失。但肥胖也常常引发高血糖、高血压、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰岛素血症、冠心病、脑卒中、下肢静脉曲张、脂肪肝、胆石症、睡眠呼吸暂停症、糖尿病、痛风症及关节炎，是很多疾病的诱因之一。

发明内容

本发明要解决目前尚无同时有效治疗骨质疏松和肥胖药品的缺陷，而提供的一种msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株。

msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步骤制备：

一、将含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/Obese’）用BamH I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；

三、msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段与经过双酶切的载体pGEX-6P-1进行酶连接，然后16℃放置连接过夜，得到载体pGEX-msCT/Obese’；

四、用载体pGEX-msCT/Obese’转化大肠杆菌BL21（DE3），选择阳性重组子，即获得msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。

本发明中msCT-rhLeptin融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明中msCT-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明msCT-rhLeptin融合蛋白采用人为改造的Leptin和鲑鱼降钙素基因编码翻译而成。具有降低使用者体重，并防治骨质疏松的效果。

本发明用于治骨质疏松和肥胖的msCT-rhLeptin融合蛋白微生物制剂，不产生拮抗反应，使用安全。

本发明msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）发酵产生的msCT-rhLeptin融合蛋白共70个氨基酸。本发明采用生物基因工程手段获得大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。采用本发明基因工程菌大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）可大规模发酵生产msCT-rhLeptin融合蛋白，具有广泛应用前景。本发明为治疗骨质疏松和肥胖奠定了物质基础。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式msCT-rhLeptin融合蛋白转基因工程菌株名为大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大肠杆菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步骤制备：

一、将含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的质粒载体pUC（msCT/Obese’）用BamH I和EcoRⅠ双酶切，获得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段（msCT/Obese’）；

二、用BamHI和EcoRⅠ双酶切质粒pGEX-6P-1；