[发明专利]一种测定甘胆酸的试剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定甘胆酸的试剂及试剂的制备方法，特别是采用乳胶增强免疫比浊法测定血清或血浆中的甘胆酸的试剂及相应的制备方法，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

血清甘胆酸(Cholyglycine,CG)是胆酸与甘氨酸结合二次的结合型胆酸之一，在肝细胞内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸(CA)和鹅去氧胆酸（CD-CA）。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12），侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合，CG由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物消化。95%胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在。正常情况下，外周血中胆酸含量甚微，正常成人无论空腹或餐后，其血清CG浓度稳定在低水平。当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆酸发生障碍，而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。测定血清甘胆酸（CG）是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。另外孕妇在怀孕的中后期，由于婴儿的增大，会压迫肝脏，使肝脏排泄胆酸发生障碍而导致甘胆酸偏高，另外由于妊娠期胎盘合成和分泌大量雌激素和孕激素以及代谢负荷增大，可诱发肝胆系统的变化，使孕妇易患妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)，对胎儿产生严重的影响，随ICP患者血清CG增高使羊水污染率、早产率、胎儿宫内窘迫率及剖宫产率增高，严重者可导致婴儿的死亡，因此测定孕妇血清甘胆酸，对及早发现ICP和了解ICP的严重程度有着非常重要的意义，甘胆酸的测定可作为筛查和随访ICP的指标。从而降低围产儿病死率。

目前检测CG常用的实验室方法有放射免疫学分析法（RIA）、化学发光免疫分析法(CLIA)、酶联免疫法（ELISA），放射免疫学分析法（RIA）检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染，标记物稳定性差，废弃物难以处理而使其受到限制。化学发光免疫分析法(CLIA)是利用化学发光物质经催化剂催化和氧化剂氧化，形成一个激发态的中间体，这种激发态的中间体回到稳定基态时，发出光子，利用发光信号测量仪测量光子数，从而间接测定CG的浓度。目前市场上有管式和板式两种试剂盒，但此法存在吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺直接标记抗体的发光效率低，标记物不稳定的缺点；而且这种直接标记法属于瞬间发光型，很难保证测试结果的稳定性和重复性，而且需要特殊的检测仪器。不便于常规实验室开展。而利用生物素-亲和素系统检测CG的电化学发光免疫试剂盒，需要配套昂贵的全自动电化学发光检测仪，常规实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担。酶联免疫法（ELISA）自动化程度不高，且受人为因素影响较大，重复性差，整个反应测定时间也很长（至少需要40分钟）。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种甘胆酸检测试剂；所提供的试剂应具有操作简单、测定时间短、准确度高、重复性好的特点，并可适用于各种类型的全自动生化分析仪的甘胆酸测定；所提供的试剂制备方法应具有制作方便以及成本不高的特点。

本发明提供的技术方案是：

一种测定甘胆酸的试剂，包括以下成分及含量：

a、甘胆酸试剂1：

其余是纯化水，

试剂1的pH为7.2-8.0；

b、甘胆酸试剂2：

其余是纯化水，

所述带有抗人CG抗体的胶乳颗粒，其中的羧基胶乳微球粒径为20-500nm；

c、液体型甘胆酸参考校准品：

其余为纯化水；

所述液体型甘胆酸参考校准品包括5份形成系列浓度的参考校准品；5份参考校准品中的CG含量由低到高分别为1.25mg/ml、2.5mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml、20.0mg/ml；或者，

所述液体型甘胆酸参考校准品是单点高浓度的CG参考校准品。

所述缓冲液是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸（TAPS）缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸（MOPS）缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸（MOPSO）缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或两种以上任意比例的混合。