[发明专利]一种蛹虫草子实体液态培养培养基及其培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种真菌子实体培殖方法，更加具体的说涉及一种蛹虫草液态培养的培养基及其培养方法。

技术背景

蛹虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草同属虫草属(Cordyceps)，亲缘关系十分接近。蛹虫草始载于《新华本草纲要》，其“味甘、性平”，有“益肺肾、补精髓、止血化痰”之功效。蛹虫草富含虫草素、腺苷、多糖、超氧化物歧化酶(SOD)、虫草酸、氨基酸等活性成分，以及硒、锌、铁等矿物质元素。大量的药理及临床试验证明，蛹虫草的功效成分和药理作用接近或超过冬虫夏草，可作为冬虫夏草的替代品，具有较大的开发利用价值。

蛹虫草又名北冬虫夏草、北虫草等，分类学上属于子囊菌亚门(Ascomycotina)、核菌纲(Pyrenomycetes)、球壳菌目(Sphaeriales)、麦角菌科(Claviciptiaceae)、虫草属(Cordyceps)，与冬虫夏草为同属。它是由蛹虫草菌的菌丝体通过各种方式浸染鳞翅目等昆虫，以昆虫体内的营养物质为营养基础，生长成子座(子实体)，子座单生或丛生，橙黄色，长2-5cm。相对来说，蛹虫草的生长环境远没有冬虫夏草那样狭窄，主产于云南、吉林、辽宁、内蒙古等省区，寄生于针叶林地、阔叶林或混交林地表土层中的鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫幼虫或蛹体上。蛹虫草的天然资源非常有限，规模化利用困难。随着科学技术的进步，经科研人员的攻关，人工培育蛹虫草已获成功，目前主要有以下3种培养方法：一是以终产物虫草菌丝体为目的，将蛹虫草液体菌种，接种到麦麸、稻糠等固体培养基上，经发酵后获得蛹虫草菌丝体；二是以虫草子实体为目的，将蛹虫草菌种接种到大米等固体培养基上，在一定的环境适宜条件下，培养可得蛹虫草子实体(又名虫草花)；三是以虫菌复合体为目的，将蛹虫草菌种接种在活体柞蚕、家蚕幼虫或蛹体内，适宜的环境条件下，培养可获得虫菌复合体-蚕蛹虫草。

发明内容

为解决蛹虫草子实体培养中原料价格过高、培养基灭菌难度大等问题，本发明提供了一种蛹虫草子实体的生产方法，用液态的碳源和氮源替代在蛹虫草发菌和培养阶段采用的固态培养基，蛹虫草子实体的子座固定在无机培养介质上，具体的发明内容为：

一种蛹虫草子实体液态培养培养基，所述培养基由固体无机培养介质和液态营养液组成。

所述无机培养介质为粒度分布维度值介于1.2-3.5之间的无机多孔材料。

所述无机培养介质为浮石、煤渣、矿渣中的一种。

所述无机培养介质在培养基中的铺垫厚度为3cm；所述无机培养介质为颗粒状，颗粒直径为1-10mm之间。

所述发菌培养液和出草培养液两部分组成；其中，每30cm×30cm面积的发菌培养液的配方为：麦芽糖100g，酵母膏20g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB₁10mg，水1000mL，pH6.5；

每30cm×30cm面积的出草培养液为：蔗糖250g，酵母膏30g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.8g，VB₁10mg，水1000mL，pH7.5。

一种蛹虫草子实体液态培养方法，包括以下步骤：

1）将蛹虫草菌株从PDA培养基直接接种到权利要求4所述的发菌培养液中，置于发酵罐发酵，至发菌培养液产生菌丝；

2）将步骤1）所述产生菌丝的发菌培养液直接注入到权利要求3所述的无机培养介质中；

3）在洁净度优于10级的条件下进行发菌阶段培养，培养为25±2℃，湿度为80-95%，暗室培养至菌丝长满无机培养介质；

4）完成发菌阶段培养后继续出草阶段的培养，培养为18±2℃，湿度为75-85%，光照12小时强度1000-5000lux，暗室12小时，培养至无机培养介质中物流动水时，加入权利要求4所述的出草培养液；

5）继续出草阶段的培养得到蛹虫草子实体。

所述发菌培养时间为7-10天，所述出草阶段的培养时间为25-30天。

本发明的有益技术效果是：本发明的提供的蛹虫草子实体液态培养培养基及其培养方法，其解决了传统培养基需要菌盒整体灭菌的问题，培养基的活性成分利用度高，培养基残留物经过烁烧灭菌后可以继续使用。

具体实施方式

实施例1培养基碳源的考察

发菌培养液配方：碳源Ⅰ，酵母膏20g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB110mg，水1000mL，pH6；试验中更换相应碳源；