[发明专利]一种高纯度维生素B12的纯化工艺

说明书

技术领域

本发明属于生化产品的分离纯化领域，具体涉及一种高纯度维生素B₁₂（以下简称VB₁₂）的纯化工艺。

背景技术

维生素B₁₂，简称VB₁₂，又叫钴胺素，自然界中的VB₁₂都是微生物合成的，高等动植物不能制造VB₁₂。在保健食品和注射针剂等领域，随着食品和药品的安全要求越来越高，VB₁₂用途越来越广泛，相应地制备生产高纯度的VB₁₂渐成技术发展的必然要求和广大技术人员的努力目标。 

目前，目前商品化的VB₁₂由工业发酵法获得， VB₁₂的分离纯化工艺有:溶剂法，膜法，树脂吸附法，磺酸Zn²⁺型配位吸附法等，上述方法分别存在溶剂消耗大，生产繁琐，离子污染，产品纯度及收率不高等技术问题，上述方法所得到的产品经重结晶可得到90%左右的粗品，但在这种粗品中残留的杂质难以再用重结晶的方法除去，造成产品品质不高只能做低档的原料出售。

发明内容

为解决现有技术产品中杂质难以除去、产品纯度不高的技术问题，本发明的目的是：提供一种不仅工艺简单成本低，而且可达到高纯度和高产率的VB₁₂的纯化工艺。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为层析填料，使用低浓度的丙酮水溶液做流动相，实现对VB₁₂的纯化。

一种高纯度VB₁₂的纯化工艺，其特征在于包括下述步骤：

1>色谱柱平衡：采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为层析填料，装入色谱柱作为固定相，装柱完成后，用两倍柱体积去离子水以1～4倍柱体积每小时的流速平衡色谱柱；

2>样品制备：称取纯度为85～93%的VB₁₂粗品，加入到去离子水中搅拌溶解完全，使VB₁₂粗品的浓度为5～12.5mg/ml，用滤纸过滤得到样品液备用；

3>上样：将步骤2>得到的样品液以1～4倍柱体积每小时的流速连续流过所述色谱柱，所用树脂的体积（L）和样品的重量（g）比为1:10～1:30；

4>洗脱：上样结束后，用去离子水冲洗1～4倍柱体积，然后以6.25%的丙酮水溶液为流动相，1～4倍柱体积每小时的流速洗脱，所述洗脱液用高效液相色谱仪检测纯度，将纯度合格的洗脱液合并得到收集液；

5>后处理：将步骤4>得到的收集液用纳滤膜浓缩，再经喷雾干燥，得到纯度大于99%的VB₁₂。

所述的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂。

其中步骤3>中样品液优选以2倍柱体积每小时流速连续流过色谱柱。

其中步骤4>中流动相洗脱流速优选以2倍柱体积每小时。

采用本技术方案的有益效果是：将大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂作为层析填料，装入色谱柱成为固定相，釆用的树脂具有吸附量大，选择性好；把含有待分离的VB₁₂粗品溶液流过该色谱柱，然后再把吸附在树脂上的VB₁₂洗脱下来而实现VB₁₂和杂质的分离。本发明具有工艺简单，生产效率高，容易工业化生产，环境污染小等优点，一次操作就可以得到99%以上纯的VB₁₂。

具体实施方式

下面通过实施例更详细的说明本发明，但本发明的范围不限于这些实施例。

实施例中采用的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为的HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂：HZ PS20ss树脂，HZ PS816树脂、HZ PS818树脂或HZ PS830树脂，系市售，由上海华震科技有限公司生产。

实施例1

样品制备: 称取16g VB₁₂粗品(纯度92.5%)，加入到1280ml去离子水中，搅拌使样品溶解完全，后用滤纸过滤备用, 得到的样品浓度为12.5mg/ml；