[发明专利]一种H9N2禽流感病毒及其用途

说明书

本申请是申请号为“201010192680.3”、申请日为“2010年06月04日”、发明名称为“禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗”的分案申请。

技术领域：

本发明属于生物技术领域,涉及三种H9N2禽流感病毒的新毒株及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗。

背景技术：

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康的传染性疾病。禽类感染禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)后,症状可表现为非显性感染、亚临诊感染,或轻度呼吸道疾病、产蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多种形式。根据AIV对易感鸡致病性的差异,可将AIV分为高致病性AIV和低致病性AIV。高致病性AIV(HPAIV)感染禽类所导致的禽流感对养禽业具有毁灭性的打击,故被国际兽疫局规定为A类疾病;而一些低致病性AIV，如H9AIV的感染虽然对感染禽的致死率低,但可引起产蛋量的减少和淘汰率的上升,并造成免疫抑制,引起其他疫病的发生或混合感染，对养禽业造成的经济损失也相当可观。因此,AI一直是威胁世界养禽业的主要疾病之一，世界各国都十分重视对AIV的研究工作。已有研究表明来自于禽类的H9N2禽流感病毒能偶尔从禽类传染给哺乳动物，包括人和猪。Ck/Bei-like和G1-like H9N2禽流感病毒在1990底首次从人和猪中分离到。2003年分离到的人H9N2禽流感病毒是一个新的重组体，很可能来源于当地的活禽市场。这种跨种间传播表明目前的H9N2禽流感病毒对人仍有潜在的感染性。AIV存在着广泛的抗原漂移和抗原转变现象,其抗原变异频率很高。因此测定AIV的全基因序列，对于研究禽流感病毒的检测、分布、流行规律以及控制禽流感的流行、蔓延均具有重要的意义。本研究分离鉴定了2002-2008年上海地区活禽市场的H9N2亚型禽流感病毒，经全基因序列测定分为三种基因型，对这三种基因型毒株的8个基因片段进行关键位点的分析以及基因进化关系分析，表明这三种基因型与目前报道的基因型存在差异，为H9N2禽流感病毒Ck/Bei系中的三种新的基因型，分别命名为Y1,Y2,Y3。

发明内容：

本发明提供了三种H9N2禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗，所述的这三种H9N2禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗要解决现有技术中无法确认和预防新的禽流感病毒从而导致新的禽流感疫情在禽类或者人类传播的技术问题。

本发明提供了一种分离的禽流感病毒（Y1），其基因组由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQID NO：8所示的RNA片段组成。

本发明还提供了一种分离的禽流感病毒，其保藏号为CGMCC NO：3117。

本发明还提供了一种用于检测上述的分离的禽流感病毒的试剂盒，含有上述的分离的禽流感病毒的RNA抽提液、RT反转录反应液和含有引物的PCR反应液，所述的PCR反应液中的引物为：

HA基因上游引物P1:5’-CAGGGGAATTTCACAACCAGTCAAA-3’，

下游引物P2:5’-GCCAGGGTGTTTTTGCCAATTATATAC-3’；

M基因上游引物P1：5’-AAGATGAGCCTTCTAACCGAGGTC-3’，

下游引物P2:5’-CGGGGTAGTTTTTTACTCCAGCTCTATG-3’；

NA基因上游引物P1：5’-AGCAGGAGTGAAAATGAATCCA-3’，

下游引物P2:5’-AATTGCGAGAGCTTATATAGGC-3’；

NP基因上游引物P1：5’-ATCATGGCGTCTCAAGGCACCAAA-3’，

下游引物P2:5’-GCCTCTTTAATTGTCATACTCCCCTGC-3’；

NS基因上游引物P1：5’-ACATAATGAACTCCAACACTGTGTC-3’，

下游引物P2:5’-GCAAATAAGCTGAAACGAGAAAGTTC-3’；

PA基因上游引物P1：5’-AAATGGAAGACTTTGTGCGACAATG-3’，

下游引物P2:5’-ACAACTATCTCAGTGCATGTGTGAG-3’；