[发明专利]突变型大肠杆菌忌热毒素、其制备方法、增加免疫反应的佐剂及疫苗

说明书

技术领域

本发明是关于一种突变型大肠杆菌忌热毒素及其制备方法，特别是关于一种提升突变型大肠杆菌忌热毒素的产量以降低蛋白质佐剂与疫苗的生产成本及其方法。

背景技术

大肠杆菌属在分类学上归属于肠道细菌科(Enterobacteriaceae)，为兼性厌氧、不产孢的革兰氏阴性菌。大多数的大肠杆菌对人畜无害，但部分血清型的大肠杆菌则会引起腹泻、食物中毒及肠道外感染等症状。致病型大肠杆菌依发病型态的不同，可分为下痢性大肠杆菌(Diarrheagenic E.coli)及肠道外致病大肠杆菌(Extraintestinal pathogenic E.coli，ExPEC)两类。其中，下痢性大肠杆菌又可分为肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coli；EPEC)、肠毒素产生性大肠杆菌(enterotoxigeic E.coli；ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasive E.coli；EIEC)、肠道出血性大肠杆菌(enterohemorrageic E.coli；EHEC)及肠附着性大肠杆菌(enteroadherent aggregative E.coli；EAggEC)等五类。肠道外致病大肠杆菌可分为尿道致病性大肠杆菌(Uropathogenic E.coli；UPEC)、脑膜炎大肠杆菌(Neonatal meningitis E.coli；NMEC)、败血性大肠杆菌(Septicemic E.coli；SEC)及细胞脱附性大肠杆菌(cell-detaching E.coli；CDEC)等四类(Kaper et al.，2004；Pavankumarand Sankaran，2008)。

肠毒素产生性大肠杆菌会产生热稳定毒素(heat stable toxin；ST)和忌热毒素(不耐热肠毒素，heat labile toxin；LT)(Yamamoto and Nakazawa，1997)。热稳定毒素可依照其对甲醇的溶解与否及对蛋白酶的抗性再区分为STI(STa)及STII(STb)。其中STI是由18～19个氨基酸所组成的肽，分子量约在1500～2000Daltons，可溶解于甲醇中，对蛋白酶具有抗性。STII则是由48个氨基酸所组成的肽，无法溶解于甲醇中，对蛋白酶具有敏感性(Dubreuil，2008)。热稳定毒素在100℃下加热30分钟仍不会失去活性。忌热毒素与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)所产生的霍乱毒素(cholera toxin；CT)具有相似的结构及作用机制，依据其与CT抗血清中和反应与否，又可区分为LTI及LTII。其中LTI可与CT抗血清反应；依照来源宿主的不同，又可区分为LTp-I及LTh-I；LTp-I是由猪只来源的ETEC所产生，LTh-I则是由人类来源的ETEC所产生。LTh-I及LTp-I氨基酸的相似度达95％以上，但毒性有别。体外及体内试验的结果显示，LTp-I的毒性低于LTh-I(Lasaro et al.，2008)。LTII则无法与CT抗血清反应；依据氨基酸组成及抗原性的不同又可区分为LTIIa、LTIIb及LTIIc。这些忌热毒素在65℃下加热30分钟即失去活性。

不同菌株产生毒素的能力有所不同；如鞭毛抗原K88阳性反应的菌株通常会产生LT及STI，鞭毛抗原K99或987P1阳性反应的菌株仅会产生STI(Yamamoto and Kakazawa，1997)。