[发明专利]一种原代细胞大规模继代培养的方法

权利要求书

1.一种原代细胞大规模继代培养的方法，其步骤是：

（1）批量获取保持其细胞二倍体生物学性状的、高活力的、适于利用生物反应器或细胞工厂的继代细胞；

（2）对步骤（1）获取的继代细胞，进行筛选；

（3）利用生物反应器或细胞工厂大规模培养步骤（2）筛选出的继代细胞。

2. 根据权利要求1所述的原代细胞大规模继代培养的方法，其特征在于，所述原代细胞是猴肾细胞、地鼠肾细胞、家兔肾细胞、鸡胚细胞、沙鼠细胞、牛肾细胞、狗肾细胞中的一种。

3.根据权利要求2所述的原代细胞大规模继代培养的方法，其特征在于，在步骤（1）中，来源于动物机体组织的细胞在利用转瓶培养的方法初代培养成功后，保持其在反复传代中不发生转化或不停止生长其措施是：

（1.1）控制 pH值为7.2~7.4；

（1.2）在5%CO₂环境中培养；

（1.3）根据原代细胞的种类及分化程度在转瓶内表面包被胶原、多聚赖氨酸、多聚鸟氨酸、层粘连蛋白、纤连蛋白；

（1.4）换液间隔时间最长为8天，或连续灌注，换液时，弃掉1/2~2/3旧培养液；

（1.5）细胞生长至75~95%汇合阶段即按一分为二的原则进行传代；

（1.6）培养液与液面以上空间的体积比例保持在1:8~1:12之间，加入培养液的高度控制在8mm以下。

4.根据权利要求2所述的原代细胞大规模继代培养的方法，其特征在于，步骤（2）所说的筛选的措施是：

（2.1）原代细胞培养物细菌、真菌、支原体、病毒外源污染检测；

（2.2）用乳糖脱氢酶法测定乳糖浓度，用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖浓度，通过葡萄糖消耗来判定原代动物细胞的生长状态；

（2.3）细胞损伤检测，通过细胞损伤检测来调整批量获取高活力细胞操作工艺参数。

5.根据权利要求2所述的原代细胞大规模继代培养的方法，其特征在于，步骤（3）所说的大规模培养的措施是：选取细胞工厂或剪切力小的固定床篮式培养系统生物反应器进行原代细胞大规模继代培养。