[发明专利]鉴定大豆耐盐性的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定大豆耐盐性的分子标记及其应用。

背景技术

土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的主要非生物因素之一，全球近1/5的耕地面积已受到盐渍化的影响。我国耕地面积中有近1/10是盐渍化土壤，近年来，不合理灌溉和塑料大棚面积扩大等农业措施加剧了土壤次生盐渍化。栽培大豆[Glycinemax(L.)Merr.]是我国重要的农作物之一，是植物蛋白和食用油的重要来源，属于中等耐盐植物。在盐渍土地上种植大豆，其品质下降，产量下降甚至绝收。因此选育耐盐品种对于开发和利用盐渍化土壤具有重要意义。

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接反映。与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比，DNA分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定大豆耐盐性的分子标记及其应用。

所述分子标记为如下1）或2）的分子标记：

1）分子标记A和分子标记B；

2）分子标记A；

所述分子标记A为用序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成的引物对PCR扩增大豆品种冀豆12号的基因组DNA得到的大小为145bp的分子标记；

所述分子标记B为用序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成的引物对PCR扩增大豆品种冀NF58的基因组DNA得到的大小为166bp的分子标记。

所述分子标记A和所述分子标记B是将所述PCR扩增的产物在5—7%（如6%）的聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离得到的；

所述6%聚丙烯酰胺凝胶是指每配制100mL所述聚丙烯酰胺凝胶使用丙烯酰胺57g和双苯酰亚胺3克。

本发明保护上述分子标记在大豆育种中的应用。

本发明还提供一种鉴定或辅助鉴定耐盐大豆的方法，包括用序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成的引物对PCR扩增待测大豆的基因组DNA，若所述PCR扩增的产物为所述分子标记A，则所述待测大豆为耐盐大豆或候选为耐盐大豆；若所述PCR扩增的产物为所述分子标记B，则所述待测大豆为盐敏感大豆或候选为盐敏感大豆。

本发明保护上述方法在筛选耐盐大豆中的应用。

本发明保护上述方法在筛选盐敏感大豆中的应用。

在上述方法或应用中，所述耐盐大豆为盐害指数≤60.0%的大豆品种或株系；所述盐敏感大豆为盐害指数＞60.0%的大豆品种或株系；

所述盐害指数的计算公式如下：

所述盐害类别分为5级：1级为待测大豆植株有4片以上绿叶，2级为待测大豆植株有3片绿叶，3级为待测大豆植株有2片绿叶，4级为待测大豆植株有1片绿叶，5级为待测大豆植株仅心叶存活或死亡；

所述盐害类别的鉴定时期如下：所述待测大豆植株第一个三出复叶完全展开时置于浓度为150mmol/L NaCl下培养至对照大豆品种Clark完全枯死。

在上述方法或应用中，所述待测大豆为大豆品种冀豆12号、冀NF58或由所述冀豆12号和冀NF58衍生的品种或品系。

在上述方法或应用中，所述由冀豆12号和冀NF58衍生的品种或品系为将所述冀豆12号和冀NF58杂交并繁衍至F₂代以上的世代。

在本发明的实施例中，所述由冀豆12号和冀NF58衍生的品种或品系为以冀豆12号为母本、冀NF58为父本的F_6∶11重组自交系群体中的家系。

实验证明，与苗期盐害指数鉴定方法相比，用序列表序列1所示的单链DNA和序列表序列2所示的单链DNA组成的引物对，PCR扩增待测大豆（以冀豆12号为母本、冀NF58为父本的F_6∶11重组自交系群体的117个家系）的基因组DNA，通过得到的分子标记（分子标记A和分子标记B）预测上述待测大豆耐盐性，准确率可达98.2%。本发明可用于鉴定或筛选大豆品种或株系的耐盐性，大大提高了育种效率，在实际育种和生产中具有广阔的应用前景。

附图说明