[发明专利]以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用

权利要求书

1.一种以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用，其特征在于，以多聚赖氨酸为载体蛋白，与双酚酸偶联制备双酚A包被抗原。

2.根据权利要求1所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用，其特征在于，依次包括下述步骤：1）将双酚酸完全溶解在有机溶剂中；2）将NHS和EDC·HCL分别完全溶解在机溶剂中；3)将步骤2）制得的溶液滴加至步骤1）制得的溶液中，室温避光搅拌1-24h，离心分离取上清液得A液；4）将多聚赖氨酸溶于磷酸缓冲溶液中成B液；5）将步骤3）制备的 A液滴加B液中，室温避光搅拌1-24h，离心分离，上清液转移到透析袋，用磷酸缓冲溶液透析24-96h，每12 h换一次透析液，最后将透析液经冷冻干燥得到双酚A人工包被抗原即BVA-PLL；

其中：双酚酸与NHS、EDC·HCL、多聚赖氨酸的摩尔比为：30～200﹕30～400﹕30～400﹕1。

3.根据权利要求1或2所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用，其特在在于，所述的多聚赖氨酸为多聚左旋赖氨酸或者多聚右旋赖氨酸或者多聚左旋赖氨酸和多聚右旋赖氨酸混合使用。

4.根据权利要求2所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用，其特在在于，步骤1）和步骤2）所述的有机溶剂为四氢呋喃或者N,N-二甲基甲酰胺或者二甲基亚砜的其中之一。

5.根据权利要求2所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原制备方法及其应用，其特在在于，步骤4）和步骤5）所述的磷酸缓冲溶液的 pH值为6-8。

6.权利要求1所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原的应用，其特征在于，应用双酚A包被抗原作为双酚A酶联免疫检测试剂盒，所述的双酚A酶联免疫检测试剂盒由包被抗原的固相载体、抗体工作液、双酚A标准溶液、酶标二抗溶液、抗体稀释液、洗涤浓缩液、底物溶液和终止液组成；

其中：所述的固相载体为包被有双酚酸与多聚左旋赖氨酸偶联物的96孔聚苯乙烯酶标板，并封闭了微孔表面未吸附双酚A 抗原的位点；所述的双酚A 标准溶液的浓度分别为：0ng/mL， 3ng/mL， 8ng/mL，25ng/mL，75ng/mL，224ng/mL，673ng/mL，2018ng/mL。

7.根据权利要求6所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原的应用，其特征在于，所述的抗体工作液为兔源多克隆抗双酚A的抗体。

8.根据权利要求6所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原的应用，其特征在于，所述的底物液为含有四甲基联苯胺和过氧化氢的pH5.0磷酸柠檬酸缓冲溶液；所述的终止液为2mol/L硫酸溶液。

9.根据权利要求6所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原的应用，其特征在于，所述的洗涤浓缩液为10X含5% 吐温-20，pH7.0，浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液。

10.根据权利要求6所述的以多聚赖氨酸为载体的双酚A包被抗原的应用，其特征在于，所述的酶标二抗溶液为羊抗兔-辣根过氧化物酶。