[发明专利]一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗，其特征在于包括以下几种免疫抗原：

2.根据权利要求1所述的一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗，其特征还在于，上述的重组三价肠毒素SLS蛋白的分子量大小为23kDa，纯度达95%以上。

3.根据权利要求1所述的一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗，其特征还在于，上述的K88菌毛蛋白的分子量大小为26kDa，K88菌毛等电点3.92，其蛋白纯度达95%以上。

4.根据权利要求1所述的一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗，其特征还在于，上述的K99菌毛蛋白的分子量大小为17kDa，K99 菌毛等电点 9.75，其蛋白纯度达95%以上。

5.根据权利要求1所述的一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗，其特征还在于，上述的F41菌毛蛋白的的分子量大小为29.5kDa，F41菌毛等电点 4.6，其蛋白纯度达95%以上。

6.权利要求1-5任一所述的一种抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗的制备方法，包括如下步骤：

（1）制备采用的重组三价肠毒素SLS蛋白为三价重组蛋白，是不耐热性肠毒素LTB、耐热性肠毒素STa及STb基因经融合，载入原核质粒并转化宿主细胞；

（2）表达重组三价肠毒素SLS蛋白的重组菌在TSB培养基中接种培养至OD₆₀₀=0.6，加入IPTG，继续培养3-6h，细胞破碎获得包涵体，再洗涤、溶解、复性、纯化、浓缩获得SLS蛋白溶液；

（3）改良MINCA培养基中分别接种K88、K99、F41标准菌株，培养24h

以后，菌液60℃温浴振荡，获取上清液粗蛋白，等电点纯化，获得菌毛蛋白溶液；

（4）调整各蛋白浓度至权利要求书1-5任一所述的浓度配比，各种蛋白混合

后，加入铝佐剂或者油佐剂，采用疫苗混合器混合均匀，制备为成品疫苗。