[发明专利]检测邻苯二甲酸二丁酯的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测邻苯二甲酸二丁酯的酶联免疫试剂盒，其特别适于白酒中邻苯二甲酸二丁酯含量的检测。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）属于邻苯二甲酸酯类，是目前国内外工业生产中使用最多的塑化剂（又称增塑剂），广泛存在于食品包装、化妆品、医疗器材以及环境水体中。这类塑化剂并非食品或食品添加物，但会通过环境迁移、食品包装迁移及非法添加等进入食品，对人体健康产生毒害作用，如造成内分泌失调，影响正常生育能力，在体内长期蓄积会导致畸形、癌变和突变，对心血管、消化和泌尿系统也有很大伤害。因此，我国卫生部卫办监督函〔2011〕551号文件中规定：严禁在食品、食品添加剂中人为添加邻苯二甲酸酯类物质，食品、食品添加剂中的邻苯二甲酸二（α-乙基已酯）（DEHP）、邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）和邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）最大残留量分别为1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。

目前文献报道有关邻苯二甲酸酯类物质的检测方法有气相色谱法、超高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、气相色谱-离子阱质谱法等。但研究大多集中于环境样品和塑料包装材料，对于食品中的污染情况检测研究较少。我国食品中邻苯二甲酸酯检测使用“GB/T 21911-2008《食品中邻苯二甲酸酯的测定》”，包装中邻苯二甲酸酯检测使用“GB/T 21928-2008《食品塑料包装材料中邻苯二甲酸酯的测定》”，两种检测方法均运用气相色谱-质谱联用（GC-MS）的方法进行测定。该方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用。与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构简单、使用方便、价格便宜、便于携带的用于邻苯二甲酸二丁酯检测的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体、酶标记物、邻苯二甲酸二丁酯标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、样本稀释液，所述包被原为邻苯二甲酸二丁酯偶联抗原，所述酶标记物为酶标记抗抗体。

所述邻苯二甲酸二丁酯偶联抗原是由邻苯二甲酸二丁酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原是由邻苯二甲酸酐与正丁醇、4-氨基丁酸反应得到，所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体是以邻苯二甲酸二丁酯偶联抗原作为免疫原制备获得，所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体可为邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体或邻苯二甲酸二丁酯多克隆抗体，其中优选邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体。

所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体，其中优选羊抗鼠抗抗体。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记的抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括邻苯二甲酸二丁酯标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、样本稀释液。

所述邻苯二甲酸二丁酯标准品溶液6瓶，浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.06mg/L、0.18mg/L、0.54mg/L、1.62mg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A液为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1~2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5%~1.0%吐温-20、0.01‰~0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

所述样本稀释液优选为pH值为7.0、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。