[发明专利]草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种草莓黄萎病的膏状生防制剂、 

制备方法、应用及其专用菌株。

背景技术

草莓（Fragaria ananassa）属于蔷薇科（Rosaceae）草莓属多年生草本植物，目前世界草莓每年的产量已经超过500万吨，在世界小浆果生产中其产量荣居首位，近年来大棚栽培草莓在逐渐兴起，种植面积逐渐扩大，但却存在着轮作换地与设施固定的矛盾，连作障碍日益明显，草莓连作病害是目前制约草莓生产的主要因素，尤其是草莓黄萎病，世界各国草莓产区普遍流行此病，该病害的发生，轻者导致减产减收，重者绝收，严重制约了草莓的可持续发展。 

草莓黄萎病（Fusarium oxysporum Schl.f.sp.lagenaria Winks et Wi）是草莓种植中一种常见的土传性病害，由大丽花轮枝孢菌（Verticllium albo-atrum Reinke dt Berthold和Verticillium dahliae Klrmahn）病原菌侵染引起病害。据调查显示，第二年连茬栽种草莓地草莓黄萎病发病率达82.9％，第三年发病率可达100％。为此，草莓黄萎病的生物防治特别是生物农药的研究与开发是草莓生产可持续发展的需要。微生物农药对环境的选择压力较小，且不易使靶标病原菌产生抗药性，因此，生物源农药的研究将会为人们提供更安全更高效的防治草莓黄萎病的途径。 

现在已用于防治草莓黄萎病的微生物主要有枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilis ) 、假单胞菌( Pseudomonas sp. ) 、沙雷氏菌( Serratia sp. ) 、VAM真菌等，剂型主要为可湿性粉剂、悬浮剂、油悬浮剂等。但是到目前为止，尚没有用棘孢木霉菌株（Trichoderma asperellum）及其膏状生防制剂防治草莓黄萎病的相关报道。 

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术中存在的不足和问题，提供一种用于防治高效防治草莓黄萎病的基因工程菌菌株、含该菌株的膏状生防制剂及其制备方法和应用。 

为了实现本发明的目的，本发明提供了一株基因工程菌菌株，其分类命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20, 其保藏编号为：CGMCC NO：4899。 

本发明还提供了一种草莓黄萎病的膏状生防制剂，其中，所述制剂的活性成分为上述提及的所述棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20的菌丝与厚垣孢子。 

进一步地，所述菌丝与厚垣孢子的比例，由以下培养方法决定： 

将在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上长好的棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20孢子用无菌水洗下，调节成孢子含量为10⁵孢子/mL的接种液，按5%（V/V）接种量接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，振荡培养48小时；将上步所得培养液以10%（V/V）的接种量再次接种于马铃薯葡萄液体培养基中振荡培养48小时进一步扩增后，再将所得培养液以10%（V/V）的接种量再次接种于含20L发酵培养液的发酵罐中进行发酵培养后离心得到。

优选地，所述发酵罐中的发酵培养液各组分的重量份含量为：甜菜液380-420、七水硫酸镁3-5、磷酸二氢钾38-42；所述发酵的条件为：溶氧100%，搅拌速度为300-400转/分，发酵温度25-27 摄氏度，发酵时间48 小时，pH 7.0-7.2；所述振荡培养的条件均为140-160转/分、25-27摄氏度；所述发酵培养后离心的条件为7500-8500转/分，离心10分钟。 

最佳条件为：所述发酵罐中的发酵培养液含量为：甜菜液400.0g、七水硫酸镁4.0g、磷酸二氢钾40.0g；所述发酵的条件为：溶氧100%，搅拌速度为350转/分，发酵温度26 摄氏度，发酵时间48 小时，pH 7.0-7.2。 

优选地，所述振荡培养的条件均为150转/分、26摄氏度；所述发酵培养后离心的条件为8000转/分离心10分钟。 

优选地，所述膏状生防制剂还包括0.001~0.05%的铜离子抑制剂。 

优选地，所述膏状生防制剂还包括5~10%的可溶性淀粉。 

优选地，所述可溶性淀粉为土豆淀粉。 

本发明还提供了一种制备上述草莓黄萎病的膏状生防制剂的方法，其中，所述方法包括：