[发明专利]黄瓜枯萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种黄瓜枯萎病的膏状生防制剂、 

制备方法、应用及其专用菌株。

背景技术

黄瓜是一种全球性的重要蔬菜作物。近年来，由于黄瓜栽培面积逐年扩大，加之大规模的南菜北运，使黄瓜成了可以周年供应的重要蔬菜，在“菜篮子工程”中占重要地位。但是，随着黄瓜生产的规模化、基地化、专业化，以及相关的生态环境变化，黄瓜生产上的病害问题显得十分突出，发生程度日趋严重，尤其是黄瓜枯萎病等土传病害危害更大，严重影响了瓜类蔬菜作物的产量和品质。 

黄瓜枯萎病（Cucumber Fusarium wilt）又称蔓割病、萎蔫病，是由尖孢镰刀菌（Fusarium axysporum f.sp.Cucumerinum）引起典型的土传病害。在长年栽培黄瓜品种的地区，黄瓜枯萎病发病率为10%~20%左右，严重的能达50%以上。据有经验的菜农估计，一般在采收前期发病的减产率为发病率的70%~100%，中期为30%~50%，生长末期的减产率则较小，严重时还可能造成绝收。因此，黄瓜枯萎病已成为严重阻碍黄瓜种植业的发展和农民的增收的重要病害。 

生产上一般采用选育抗病品种、嫁接育苗、药剂防治等方法减少枯萎病对生产造成的损失。现有的黄瓜品种，即使少数品种具有一定的抗、耐病能力（如中农5 号、津春5号等），不能从根本上解决病害的发生；嫁接技术难度较大，很难大面积推广；药剂防治作为简单、快速、有效的防治途径，得到人们的青睐，但尚无有效的农药可以防治这类病害，且长期使用现有的化学药物容易产生抗药性，而且会容易对环境造成严重污染。因此，通过寻求新型的防病、治病手段，达到有效地控制黄瓜枯萎病的危害，已成为生产实践中迫切需要解决的课题。 

微生物农药源于自然，具有环境兼容性好、持效期长、低毒安全等特点，成为各种果树病害防治的重要绿色环保途径之一。然而迄今为止，利用真菌及其膏状生防制剂高效防治黄瓜枯萎病的基因工程菌菌株则鲜有报道。 

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术中存在的不足和问题，提供一种用于防治高效防治黄瓜枯萎病的基因工程菌菌株、含该菌株的膏状生防制剂及其制备方法和应用。 

为了实现本发明的目的，本发明提供了一株基因工程菌菌株，其分类命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20, 其保藏编号为：CGMCC NO：4899。 

本发明还提供了一种黄瓜枯萎病的膏状生防制剂，其中，所述制剂的活性成分为上述提及的所述棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20的菌丝与厚垣孢子。 

进一步地，所述菌丝与厚垣孢子的比例，由以下培养方法决定： 

将在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上长好的棘孢木霉（Trichoderma asperellum）GY20孢子用无菌水洗下，调节成孢子含量为10⁵孢子/mL的接种液，按5%（V/V）接种量接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，振荡培养48小时；将上步所得培养液以10%（V/V）的接种量再次接种于马铃薯葡萄液体培养基中振荡培养48小时进一步扩增后，再将所得培养液以10%（V/V）的接种量再次接种于含20L发酵培养液的发酵罐中进行发酵培养后离心得到。

优选地，所述发酵罐中的发酵培养液各组分的重量份含量为：甜菜液380-420、七水硫酸镁3-5、磷酸二氢钾38-42；所述发酵的条件为：溶氧100%，搅拌速度为300-400转/分，发酵温度25-27 摄氏度，发酵时间48 小时，pH 7.0-7.2；所述振荡培养的条件均为140-160转/分、25-27摄氏度；所述发酵培养后离心的条件为7500-8500转/分，离心10分钟。 

最佳条件为：所述发酵罐中的发酵培养液含量为：甜菜液400.0g、七水硫酸镁4.0g、磷酸二氢钾40.0g；所述发酵的条件为：溶氧100%，搅拌速度为350转/分，发酵温度26 摄氏度，发酵时间48 小时，pH 7.0-7.2。 

 所述发酵罐中的发酵培养液含量为：甜菜液400.0g、七水硫酸镁4.0g、磷酸二氢钾40.0g；所述发酵的条件为：溶氧100%，搅拌速度为350转/分，发酵温度26 摄氏度，发酵时间48 小时，pH 7.0-7.2。 

优选地，所述振荡培养的条件均为150转/分、26摄氏度；所述发酵培养后离心的条件为8000转/分离心10分钟。