[发明专利]一种用于鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的冻干保护剂及其在制备HI抗原中的应用

权利要求书

1.一种用于鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的冻干保护剂，其特征在于所述保护剂由A液和B液按照等体积混匀制得，其中，

A液：含有质量体积百分比为1%~10%的海藻糖以及质量体积百分比为2%~10%的明胶，去离子水定容，在116℃条件下，高压灭菌30min；

B液：含有质量体积百分比为0.1%~1%的叠氮钠以及质量体积百分比为0.5%~1%的硫代硫酸钠，去离子水定容，0.22μm滤膜除菌。

2.如权利要求1所述的用于鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的冻干保护剂，其特征在于所述A液中海藻糖的质量体积百分比为5％，所述明胶的质量体积百分比为2%，所述B液中叠氮钠的质量体积百分比为0.1%，硫代硫酸钠的质量体积百分比为1%。

3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在制备鸡传染性支气管炎病毒HI抗原中的应用。

4.一种鸡传染性支气管炎病毒HI抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）病毒增殖

将鸡肾型传染性支气管炎病毒M41株用无菌生理盐水按体积比1:50倍稀释后，经尿囊腔接种11日龄SPF鸡胚，每胚0.1mL，置37℃继续孵育，弃去24h前死胚，36h后取出所有胚放入4℃冰箱过夜，收集尿囊液，4℃保存备用；

（2）病毒液浓缩与A型产气荚膜梭菌培养液处理

产气荚膜梭菌培养液按以下方法制备：将产气荚膜梭菌菌株以3%（v/v）的接种量接种于厌气肉肝汤培养基后，放入37℃温箱中培养24小时，培养液以5000r/min离心30分钟，取上清液经0.22μm微孔滤器过滤后分装即得，-20℃保存；

将收集的新鲜尿囊液以5000rpm高速冷冻离心30min，取上清液以25000rpm高速冷冻离心60min后，弃去上清液，沉淀用支气管尿囊液充分悬浮，支气管尿囊液的添加量是第一次离心后所取上清液体积的1/200，透析袋进行浓缩，浓缩到原体积的1/2；然后向悬浮液中加入20%（v/v）产气荚膜梭菌培养液，充分混合置37℃水浴作用2h，每隔20min震荡一次，作用完毕后取出病毒液置4℃保存备用；

（3）抗原的灭活

将病毒液置56℃水浴灭活30min；

（4）抗原的冻干

将权利要求1或2中所述的保护剂，等体积加入抗原液，震荡混匀后利用常规冷冻真空干燥方法冻干后即得到鸡传染性支气管炎病毒HI抗原；

（5）使用浓度为0.5%的红细胞悬液进行抗原凝集价测定，并于4℃中判定。