[发明专利]一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于绿原酸制备技术领域，尤其涉及一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法。 

背景技术

红腺忍冬花^[1，2]是忍冬科植物红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.的干燥花蕾或带初开的花，列在2005年版中国药典“山银花”项下，红腺忍冬资源丰富，主产于河南、山东、云南及广西等地，是山银花药材商品的主要来源之一。红腺忍冬为临床常用中药，其味甘、性寒，用于痈肿疗疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒、瘟病发热等症，属清热解毒之要药，山银花对多种致病菌均有抑制作用，是一种广谱抗菌中药，有“中药之中的青霉素”之美称。化学和药理研究证实^[3，4]其主要化学成分有挥发油类、有机酸类、黄酮类和苷类，绿原酸是其主要有效成分，药理作用主要有抗菌、抗病毒、解热和抗氧化，其抗菌作用的主要活性成分为绿原酸，但品种与产地不同而不同，因此金银花山及山银花中绿原酸含量的高低，是其质量优劣的重要标志。 

长期以来提取绿原酸以金银花为工业原料，但价格昂贵，对同属其它植物开发利用不够，尤其是对红腺忍冬植物叶的重视和研究程度不够，红腺忍冬各部位中都有一定的绿原酸，但含量高低不同，依次为花＞叶＞茎＞根，且叶中的绿原酸含量较高，是花的40左右％，大大超过了根茎，而忍冬叶的药源远比红腺忍 冬花丰富，采集容易，价格便宜，应该充分利用。因此研究红腺忍冬叶片绿原酸的提取，为充分利用红腺忍冬资源提供一定的理论和应用基础。 

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，旨在解决长期以来提取绿原酸以金银花为工业原料，但价格昂贵，对同属其它植物开发利用不够，尤其是对红腺忍冬植物叶的重视和研究程度不够的问题。本发明实施例是这样实现的，一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，该方法包括以下步骤：药材前处理、乙醇回流提取、浓缩、过滤、凝絮沉淀、树脂吸附分离、浓缩、绿原酸粗品、重结晶、制的绿原酸精品。具体步骤为： 

药材红腺忍冬叶片经60℃烘干，再粉碎过60目筛；称取10g红腺忍冬叶干粉置于园底烧瓶中，再加100ml、pH3、70％乙醇混合于磨口圆底烧瓶中加热提取，提取1.5小时，次数为2次，完成后，趁热抽滤，合并两次提取液，并使用旋转蒸发仪在75℃下进行浓缩，浓缩至2ml/1g药材；再用1％的醋酸溶液配成1％的壳聚糖胶体作为澄清剂，对前述浓缩液进行沉淀初步除杂；初步除杂后澄清液再上D101大孔树脂进行纯化，就上柱溶液量、上柱溶液pH值及上柱溶液吸附流速对绿原酸吸附效果的影响进行考察，确定最佳上柱吸附条件，最佳上柱吸附条件为：固液比-树脂1g∶6ml上柱溶液、乙醇pH为2、流速为40滴/min。经最佳上柱吸附条件吸附后，再就洗脱剂浓度、洗脱剂体积、洗脱剂pH值和洗脱流速对绿原酸洗脱效果的影响进行考察，确定最佳洗脱条件，最佳洗脱条件为：洗脱剂乙醇体积为20ml，乙醇浓度为20％，流速为80滴/min，pH为7；上述洗脱液乙醇相使用旋转蒸发仪在75℃下进行浓缩，再在真空干燥箱中真空干燥，干燥物以pH3的60℃热水溶解再泠却到室温，溶解液与乙酸乙酯用量比1∶2萃取，水相用乙酸乙酯萃取3-5次，乙酸乙酯相浓缩干燥得绿原酸粗品；绿原酸 粗品再用pH值3的适量甲醇溶解，再放在4℃下结晶，得到白色针状晶体，真空干燥；再进行薄层分析，以乙酸乙酯∶甲酸∶水＝10∶1∶2为展开剂展开，以1％三氯化铁乙醇溶液为显色剂，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点，阴性对照无此斑点。 

进一步，该方法进一步包括绿原酸含量测定方法，具体步骤为： 

步骤1，标准样溶液的制备 

精密称取绿原酸对照品1mg，置50mL量瓶中，加无水乙醇，使其完全溶解并稀释至刻度。摇匀，即得，每1mL中含绿原酸20ug； 

步骤2，最大吸收波长的确定 

将绿原酸标准样溶液在200～400nnl进行紫外扫描，最大吸收波长为328nm，故选328nm为检测波长； 

步骤3，标准曲线的绘制 

精密量取对照品溶液1、2、4、6、8mL，分别用无水乙醇定容至10mL容量瓶，摇匀。以无水乙醇作参比液，在328nm处测定其吸光度，以标准品质量浓度C(ug/mL)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 

进一步，绿原酸的醇提方法为： 

将10g药材与100ml的pH3，70％乙醇混合于磨口圆底烧瓶中加热提取，提取1.5小时，次数为2次；