[发明专利]食品及饮料中杏成分实时荧光PCR鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于食品质量控制领域，具体涉及一种食品及饮料中杏成分实时荧光PCR鉴定方法。

背景技术

杏普遍栽培于世界温带地区，杏原产中国，遍植于中亚、东南亚及南欧和北非的部分地区。杏肉除了供人们鲜食之外，还可以加工制成杏脯、糖杏罐头、杏干、杏汁、杏酒、杏青梅、杏话梅、杏丹皮等；杏仁可以制成杏仁霜、杏仁露、杏仁酪、杏仁酱、杏仁点心、杏仁酱菜等。

近年来，不断有媒体曝光，一些商家所售卖的杏加工产品(如杏仁露、杏仁饮料等)，其价格明显比商场里的要低很多，甚至比成本价还低。实际上是一些不法商家由于某些杏的成本较高，为了更多的经济利益，便会用假货冒充成本较高的真货销售欺骗消费者，或者在不加入杏成分的前提下，虚假标注产品中含有杏成分。由于国家质监面临无法可依的窘境。也尚无权威的鉴定机构可以对食品或饮料中的杏成分进行鉴定。

随着近年来，人们对食品的安全卫生特别重视，食品卫生指标尤其是杏产品中是否真正含有杏等原料的真伪鉴定就显得特别重要。为了尽量减轻假杏产品的不良影响，力求避免人民的合法利益受到侵害，而造成更加不利的影响。由此，急需一种食品及饮料中杏成分简便、快速的检测方法。目前我国在食品及饮料中杏成分检测方法仍是个空白，在保证方法稳定性、特异性等方面存在很多困难，这也是制约方法建立的瓶颈。

发明内容

为了解决上述实际问题，本发明建立了一种食品、饮料中杏成分检测方法研究，进行杏制品检测技术研究。采用TaqMan探针技术，能够对食品或饮料中的杏成分成份进行鉴定。该标准的研制成功及推广应用对提高进出口食品及饮料中的杏成分成份的检测效率及灵敏度，降低检测成本，检测市场上相关假冒产品，进行食品安全监测和提高检验技术具有重要意义。

本发明从以下几个方面研究：提取样品DNA，以DNA为模板，分别采用杏品种的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，直接读取实时荧光PCR的增幅现象，进行食品和原料中杏成分及其制品的鉴伪检测等，在此基础上，进行了特异性和稳定性检测；

本发明的具体技术方案如下：

本发明所述的杏（Armeniaca vulgaris）为蔷薇科(Rosaceae)李亚科(Prunoideae)杏属植物(Arm eniaca M ill.)。全世界杏属植物划分为6个地理生态群和24个区域性亚群，共有10个种。中国有普通杏(A rm eniaca vulgaris Lam.)、西伯利亚杏A.sibirica(L.)Lam、辽杏A.mandshurica(Maxim.)Skv.、藏杏A.holosericea(Betal.)Kost.、紫杏A.dasy2 carpa(Ehrh.)Borkh.、志丹杏(A.zhidanensis)C.Z.Qiao、梅(A.mume)Sieb.、政和杏(A.zhengheensis)ZhangJ.Y.etLuM.N与李梅杏(A.lim eisis)Zhang J.Y.etWang Z.M这9个种。

本发明的一方面在于：公开一种杏成分检测用引物与探针，其包括以下碱基序列：

杏成分检测引物和探针的设计：

针对杏核糖体18S rRNA基因序列设计检测用引物与探针。通过GenBank的Blast功能寻找杏核糖体18S rRNA基因（Genebank登录号普通杏AF318756.1，西伯利亚杏AF318739.1，辽杏AF318714.1）的同源基因，可见该基因具有很高的种属特异性，其他基因与该基因的同源性很小。

据此设计了本发明用于检测的杏成分的检测引物和探针如下：

杏成分检测引物和探针

上游引物：5’-TCTGCCTCAACCGATA-3’             SEQ ID NO：1

下游引物：5’-GGCGAACACGAAGAA-3’              SEQ ID NO：2

探针：FAM-5’-CTGTCTCTGCCTATGCCTCCA-3’-TAMRA  SEQ ID NO：3

其中：FAM（Carboxyfluorescein，羧基荧光素）、TAMRA（Carboxytetramethylrhodamine，羧基四甲基罗丹明）；

本发明的另一方面在于：一种杏成分检测试剂盒，其包括上文所述的杏成分检测用引物与探针。