[发明专利]一种蜡蚧菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法

说明书

技术领域

本发明涉及真菌的发酵培养基及工艺。更具体地，本发明涉及一种蜡蚧菌(Lecanicillium)发酵生产蛋白酶的培养基及方法。 

背景技术

蛋白酶是一类可以催化蛋白质水解反应的酶，它广泛存在于各种生物体中，不仅对生物体蛋白质的新陈代谢起调节作用，从细胞水平、器官水平和机体水平，呈现多种多样的功能。它们参与细胞的正常生理以及异常的病理条件下的诸如蛋白质水解、细胞生长和迁移、酶原激活、激素释放等各种复杂的过程（汪章勋等，2005）。蛋白酶在食品、化工、医疗、农业、环保等许多方面发挥重要的作用，例如可用做生物农药的虫生真菌，其蛋白酶活力与其毒力密切相关（Paoletti M, 200）。 

蜡蚧菌(Lecanicillium)隶属丝孢菌类(Hyphomycetes)，广泛分布于热带、亚热带和温带，能寄生蚧类、蚜虫类、螨类和粉虱，还可寄生鳞翅目的一些害虫及线虫、蓟马等。20世纪70年代以来，欧洲一些国家及美国、日本等国对利用蜡蚧菌防治温室蔬菜害虫给予极大重视。用蜡蚧菌发酵生产蛋白酶酶可为将来真菌防治害虫的深入研究提供科学依据。 

昆虫的体壁主要是由蛋白基质和分布其中的几丁质组成，蛋白质的类型和数量在不同种类的昆虫组织和生长阶段中是不断变化的，为了能穿透这种复杂而多变的结构，昆虫病原真菌能分泌一系列不同的体壁降解酶类，包括脂酶、几丁质酶、蛋白酶等（杨晓昱等，2005）。可产生蛋白酶的微生物种类尤其多，包括细菌、真菌和病毒。由于微生物蛋白酶比植物蛋白酶和动物蛋白酶更容易获得，而且微生物蛋白酶来源丰富。所以，微生物蛋白酶越来越成为近年来蛋白酶的研究热点。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜡蚧菌发酵生产蛋白酶的培养基及方法。 

本发明首先提供了一种蜡蚧菌发酵生产蛋白酶的培养基，所述培养基的原料含有麦芽糖或葡萄糖10g/L，蛋白胨或酵母粉 10g/L，Fe²⁺或Mg²⁺4×10^-4mol/L，V_B6或V_C0.1g/L，培养基初始pH= 6.0-9.0。 

更优选地，所述培养基的原料含有麦芽糖10g/L，蛋白胨1 0g/L，Mg²⁺4×10^-4mol/L，V_B6 0.1 g/L，培养基初始pH= 6.0。 

本发明还提供了一种蜡蚧菌发酵产蛋白酶的方法，所述方法包含以下步骤： 

（a）将蜡蚧菌接种种子培养基，制得发酵种子液；

（b）将步骤（a）中制得的发酵种子液按接种于权利要求1或2所述的培养基，250mL的三角瓶装液量为100mL，接种量5mL，于26℃，转速160 r/min下培养。

所述种子培养基的原料配方为： 200g/L土豆，葡萄糖20g/L，其余为水，自然pH。 

本发明采用的蜡蚧菌为蜡蚧菌L. lecanii FJ28（邱君志等，金属离子对蜡蚧菌几丁质酶活力的影响，激光生物学报，2009年2月）。 

采用本发明优化后的培养基，菌龄7d，发酵周期5d，发酵产生结果蜡蚧菌FJ28产蛋白酶为50U/mL以上。 

本发明的发酵方法有发酵周期短；条件温和，易于控制；提供的用于蜡蚧菌发酵生产蛋白酶的培养基，具有蛋白酶产率高，蛋白酶活力高等优点。 

附图说明

图1酪氨酸溶液的标准曲线。 

图2 碳源对产蛋白酶的影响。 

图3氮源对产蛋白酶的影响。 

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。 

实施例1

单因素实验确定培养基最优成分

（1）种子培养基和基础培养基配制

（a）20%土豆汁1L，葡萄糖20g，自然pH。分装于250mL的三角瓶，每个三角瓶含150mL。1.01MPa，灭菌20min。使用前可加入抗生素对培养基预处理。