[发明专利]一类二咖啡酰基奎尼酸类辣椒素受体拮抗剂的镇痛用途

说明书

技术领域

本发明涉及一类二咖啡酰基奎尼酸类辣椒素受体拮抗剂的镇痛用途。 

背景技术

辣椒素(VR1)受体是一种由838个氨基酸组成的非选择性阳离子通道，共有6个锚蛋白重复序列(ARD)，第5“指环”为一孔道形成部位，N端、C端均位于细胞质内。VR1受体具有脂质结合部位和质子化、磷酸化位点，可被G蛋白耦联受体和酪氨酸激酶受体间接激活。是研究最为广泛、最受关注的非选择性阳离子通道受体之一。VR1广泛分布于哺乳动物的感觉神经纤维，尤其是无髓鞘的C类和部分少髓鞘的Aδ类纤维。所以，有以上神经纤维支配的组织几乎都有VR1分布。 

疼痛是一种复杂的生理心理活动，是临床上最常见的症状之一。疼痛感觉在生理状态下起保护作用，预警有伤害来临，提示肌体规避伤害；但在病理状态下，疼痛是多数疾病的主要症状之一，而慢性疼痛本身就是一种疾病。 

引起疼痛感觉的伤害性感受(nociception)首先是通过皮肤或内脏黏膜内的伤害性感受器(nociceptor)感知，以电信号的方式通过传递痛觉的传入神经纤维(主要是无髓鞘的C类纤维和部分少髓鞘Aδ类纤维)传递给初级感觉神经元(脊髓背根神经节和三叉神经节)，由此类神经元整合后进一步传递给脊髓的二级神经元，再沿脊髓逐步上传，最终进入大脑皮层(皮层感觉中枢)才形成有意识的痛觉。无论是位于皮肤内的伤害性感受器、以及传递伤害性感觉的传入神经纤维，还是向脊髓传递的输入性纤维都是由初级感觉神经元生成，所以初级感觉神经元在痛觉产生及传导过程中都起到了极为关键的作用。而在以上传递途径中都有VR1表达，VR1作为一类与痛觉传递有密切联系的膜上离子通道型受体，在介导炎性痛、内脏痛和癌痛甚至痛觉敏化等多种疼痛中起重要作用。 

目前研究认为VR1是感知疼痛的关键分子之一。大多数研究表明辣椒素受体拮抗剂无论是在临床前还是临床研究阶段都表现出显著的镇痛作用，VR1一直是被赋予了高期望值的、研发镇痛药的靶点之一。MK-2295(NGD-8243)和GRC6211分别是由美国Merck-Neurogen公司和印度Glenmark公司研发的用于治疗牙痛的小分子药物，已经进入III期临床试验研究阶段。由于是局部用药，对体温的影响较小，还是有很好的市场前景。AMG8562是由美国Amgen公司研发的第二代VR1小分子拮抗剂，研究报告称未发现对体温有影响，ABT-102临床前研究可显著抑制实验动物的炎性痛骨关节炎疼痛、手术后疼痛和骨癌疼痛，I期临床试验发现其安全性好。 

发明内容

本发明在采用辣椒素受体拮抗剂高通量筛选模型，通过功能性验证寻找先导化合物，发现了一类二咖啡酰基奎尼酸类辣椒素受体拮抗剂，为新型的镇痛药开发提供先导化合物。本发明可为此类临床外周伤害性疼痛治疗药物的开发提供先导化合物，为新型镇痛药物开发提供线索和实验依据。 

本发明的技术方案为：在中国仓鼠卵巢癌细胞(CHO)内稳定转染辣椒素受体，建立辣椒素受体拮抗剂靶向激动剂高通量筛选模型，初筛，复筛，构效关系分析，得到一类具有镇痛作用的候选药物。具体步骤如下： 

步骤一：建立及培养稳定转染辣椒素受体的CHO细胞株。 

步骤二：激动剂模型建立及阳性药验证，确定激动剂的EC₈₀。 

步骤三：拮抗剂模型建立及阳性性药验证。 

步骤四：采用稳转细胞株和实验确定的最佳检测条件对化合物进行辣椒素受体拮抗剂的高通量筛选，得到有明显量效关系的化合物。 

本发明二咖啡酰奎尼酸在菊科、豆科、伞形科、忍冬科及旋花科植物中广泛存在，常见的有1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸、3，5-二-O-咖啡酰奎尼酸(AF-P1)、4，5-二-O-咖啡酰奎尼酸(AF-P2)及3，4-二-O-咖啡酰奎尼酸等。本发明人在中药药效物质基础研究过程中，发现二咖啡酰奎尼酸衍生物对辣椒素受体有显著的抑制作用，可以作为高效、低毒的镇痛先导化合物用于临床镇痛用途。 

附图说明：

图1：激动剂量效曲线 

图2：拮抗剂量效曲线 

图3：先导化合物1量效曲线 

图4：先导化合物2量效曲线 

具体实施方式

一、二咖啡酰基奎尼酸的分离和纯化