[发明专利]游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位磁微粒化学发光法定量测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地提供了一种简便、快速、灵敏度高、线性范围宽、稳定性好的游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位磁微粒化学发光法定量测定试剂盒及其制备方法 

背景技术

hCG是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白，由α和β二个单位通过离子键和疏水键结合在一起。α亚单位是垂体前叶激素所共有，它与FSH、LH、TSH的α亚单位结构相似。β亚单位的结构与LH等的β亚单位不同，在免疫活性上可予区别。血中β亚单位大部分以全分子形式存在，游离态的β亚单位（F-hCGβ）占hCG的1～5%左右。血中游离态的β亚单位是在受孕后6～8天产生，50～80天达到高峰，以后平稳下降，直至孕18周左右稳定于一定浓度。 

唐氏综合征又称先天愚型，21-三体综合征，是最常见的染色体疾病和弱智的病因，新生儿中发病率约为1/700左右。根据染色体核型的不同，唐氏综合征分为单纯21三体型、嵌合型和易位型三种类型。唐氏综合征的发生起源于卵子或精子发生的减数分裂过程中染色体的不分离现象，通常是随机发生的，约95%的不分离现象来源于母亲，仅5%左右发生在精子发生期。其结果是21号染色体多了一条，多出的一条染色体因剂量效应破坏了正常基因组遗传物质间的平衡，导致患儿智力低下，颅面部畸形及特殊面容，肌张力低下，多并发先天性心脏病，患者白血病的发病率为普通人群的10-20倍。生活难以自理，患者预后一般较差，50%左右于5岁前死亡。 

目前对唐氏综合征缺乏有效的治疗方法。通过孕早、中期检测孕妇血中 PAPP-A,游离β-hCG,AFP等，结合B超检查，可将约90%的唐氏综合征检测出来。对高风险胎儿，通过绒毛活检或羊水穿刺或脐血穿刺等技术作染色体核型分析可以确诊，然后流产处理。 

怀有唐氏综合征（DS）胎儿的孕妇，一部分人其血清F-hCGβ水平呈强直性升高，平均MOM值为2.3～2.4MOM。F-hCGβ在孕早期和孕中期都处于高水平。妊娠中期DS孕妇血清F-hCGβ浓度比正常至少高2倍。F-hCGβ用于DS风险的评估，敏感期可从孕早 期到孕中期（7～20周）。 

目前用于检测游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法等。酶联免疫分析法存在灵敏度低，线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。化学发光免疫分析法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多有点得到了广泛的应用。 

然而，在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，是的某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。 

磁分离化学发光免疫分析法综合采用了目前国际上的两大主流免疫分析尖端技术—悬浮磁微粒载体技术、化学发光检测技术，使系统能够充分满足临床对检测结果的要求： 

1、检测范围宽：表面巨大的磁微粒免疫反应载体、灵敏稳定的碱性磷酸酶底物APCL-Ⅰ化学发光体系保证了宽的线性范围。 

2、灵敏度高：APCL-Ⅰ发光系统，使检测信号大为增强。检测限可达10-19mol的水平；悬浮磁微粒比表面巨大，可有效捕获样品中的痕量待测物，提高检测的灵敏度。 

3、特异性强：选用单克隆抗体，与潜在交叉物无明显交叉反应 

4、快速准确：悬浮磁微粒作为反应载体，可发挥液相免疫反应的优点，保证免疫反应和发光反应迅速达到平衡，无需耗时等待；APCL-Ⅰ发光峰值到达时间短、峰值平台稳定，使检测快速、准确。