[发明专利]‘遗字138'甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基。

背景技术

食用型甘薯品种‘遗字138’于1960年由中国科学院遗传研究所育成，含糖量较高，蒸烤品质极佳。适宜春、夏薯栽培，产量高，上市早，薯块大小较均匀适中，耐贮藏性好，多年来一直为北京郊区甘薯主栽品种，常年维持在3万亩左右，且深受城乡人民喜爱。

但近几年其生产面临着一个严峻的考验：多年种植造成病毒在体内积累，出现严重的种性退化，抗病性减退，感染带毒率提高，产量降低，品质下降等问题。国内外研究表明，解决因病毒出现的一系列问题，主要有两种途径：一、培育抗病毒品种；二、茎尖分生组织培养。利用茎尖分生组织携带病毒很少、甚至不带病毒的特点，进行离体培养，获得无病毒植株。茎尖分生组织培养环节中，MS培养基配方适应性，直接影响组培苗成活率，进而种薯（苗）的繁殖效率。研究‘遗字138’专用MS培养基，有助于提高种薯（苗）数量和质量，降低种薯（苗）生产成本，提升品种推广普及速度。

发明内容

本发明的目的是提供一种‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基。

为了实现本发明目的，本发明的一种‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基，所述培养基配方为：MS+IAA 0.5～1.0mg/L+BAP 1.0mg/L+GA3 0～0.5mg/L+蔗糖30～40g/L+琼脂8g/L。

优选地，所述培养基配方为：MS+IAA 0.5mg/L+BAP 1.0mg/L+GA3 0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。

本发明还提供所述专用培养基在‘遗字138’甘薯茎尖分生组织培养中的应用。从消毒后的茎尖上剥取较大的幼叶和叶原基，切取0.3-0.4mm含有1-2片叶原基的茎尖分生组织，接种在所述专用培养基上，置于26～28℃，光照强度3000LX，13h/d的条件下培养。

其中，茎尖采用两步法消毒：用水洗净，然后用75%酒精处理30秒，再用2%次氯酸钠溶液消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗2-3次。

目前已报道的有关甘薯茎尖培养的培养基的筛选，基本上是随机选择激素配比，或单独改变培养基中某个激素的浓度，接种茎尖进行培养，从中筛选出出苗率最高的培养基配方，其属于随机性筛选，忽视了激素间的交互作用，筛选出的配方成苗率一般较低，并且工作量大。而本发明在筛选最佳培养基配方时，通过正交设计试验，选取4个因素：生长素（IAA）、细胞分裂素（BAP）、赤霉素（GA3）和蔗糖，将含有1-2片叶原基的茎尖分生组织，接种在各处理组合的培养基上进行培养，观察成苗率和芽的生长表现，统计分析得到最佳水平的培养基配方。

本发明通过正交设计试验和统计学方法，综合多个因素，同时考虑单个因素和多个因素的交互作用，最终筛选出符合试验目的的设计方案。本试验通过正交设计筛选出的‘遗字138’甘薯最佳的培养基配方为MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L BAP+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，成苗率高，有助于提高种薯（苗）数量和质量，降低种薯（苗）生产成本，提升品种推广普及速度。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例‘遗字138’甘薯脱毒茎尖苗MS专用培养基筛选试验

1.1茎尖消毒

采用两步法消毒：用流水冲洗数分钟后，在超净工作台上操作，先用75%酒精处理30秒，再用2%次氯酸钠溶液消毒5-6分钟，最后用无菌水冲洗2-3次。

1.2茎尖剥离和培养

为研究激素和糖分对‘遗字138’甘薯茎尖培养的影响，筛选最佳培养基配方，进行了正交设计试验。取四个因素：IAA、BAP、GA3和蔗糖，每个因素设三个位级(据相关研究，生长素和细胞分裂素是甘薯组织培养必需的两类激素，是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键，而赤霉素类主要作用是促进植物茎的伸长，在植物组培中并不常用，所以浓度梯度从0开始设置)，见表1，共有9个处理组合。把消毒好的茎尖放在显微镜下，用解剖刀一层一层剥取茎尖上较大的幼叶和叶原基，切取0.3-0.4mm含有1-2片叶原基的茎尖分生组织，接种在各处理组合的培养基上，每个处理3次重复，每个重复30个微茎尖。置于26～28℃，光照强度3000LX，13h/d的条件下培养。培养50天观察成苗率和芽的生长表现,统计分析得到最好水平的培养基配方，进入茎尖大量剥离和培养阶段。