[发明专利]一种提高丝裂霉素C产率的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高丝裂霉素C产率的制备方法，属于抗生素微生物发酵培养领域。

背景技术

丝裂霉素C是属于苯醌类抗生素，是一类具有独特结构和独特生物活性作用抗生素它的分子结构：

丝裂霉素C是有头状链霉菌产生的属于苯醌化合物的一种，丝裂霉素C不但具有广谱抗肿瘤作用，而且对青光眼、慢性泪囊炎等眼科疾病有良好的治疗作用，具有良好的应用前景。但目前工业上通过发酵培养方法生产丝裂霉素C时，所产生的产物中丝裂霉素C的含量通常仅占约12％以下，有时甚至只有痕迹量。

因此研发出一种提高丝裂霉素C产率的方法以降低生产成本、适应工业化生产的需要是本领域亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种丝裂霉素C的制备方法，采用该方法发酵产生的活性产物丝裂霉素C含量高，在代谢活性产物中含量可达30-45％，具有良好的工业化生产前景。

实现本发明的目的的技术方案是一种提高丝裂霉素C产率的制备方法，包括如下步骤：

（1）制备专用发酵培养基：向丝裂霉素C的发酵培养基中添加含瓜氨酸和精氨酸复合前体，以及HZ-21大孔吸附树脂，每升发酵培养基添加0.02-0.06升复合前体溶液，每升发酵培养基添加2—5克HZ-21大孔吸附树脂，用质量百分比浓度不超过10%的碱溶液将pH值调至7.1-7.2，复合前体溶液的配制方法：每升纯化水中加瓜氨酸10—15克、精氨酸5—7.5克，且所加瓜氨酸与精氨酸的质量比为2:1，均质后至少静置20小时后使用；

（2）将产生丝裂霉素C的头状链霉菌接种于斜面培养基上进行培养，在28±2℃培养6-8天，然后接种于种子培养基培养，在28±2℃培养30-48小时，再转接于步骤（1）制备的发酵培养基于28±2℃培养168-192小时，当代谢产物中丝裂霉素C含量最高时放罐，从中回收HP-21大孔吸附树脂；

（3）然后向回收过HZ-21大孔吸附树脂后的发酵培养液中先加入质量为发酵培养液质量0.01％—0.05％的十二烷基磺酸钠，再加入质量为为发酵培养液质量0.01％—0.02％的硫酸锌，用质量百分比浓度不超过10%的碱溶液将pH值调至8.0-10.0后过滤，滤液再上HZ-21大孔吸附树脂柱动态吸附；

（4）合并回收的HZ-21大孔吸附树脂和动态吸附后的HZ-21大孔吸附树脂柱中的树脂，并对合并后的所有树脂进行提取和精制即得到丝裂霉素C产品。

 且所用头状链霉菌为头状链霉ATCC27422或头状链霉ATCC27422的诱变菌种。步骤（4）提取和精制的过程为依次进行动态解析、浓缩、萃取、层析、再浓缩、结晶、真空干燥。

由上述技术方案可知，本发明向丝裂霉素C的发酵培养基中添加含瓜氨酸和精氨酸复合前体，以及HP-21树脂，制备出专用发酵培养基，，将产生丝裂霉素C的头状链霉菌依次通过斜面培养基、种子培养基培养后，再转接于制备的专用发酵培养基培养。由于瓜氨酸和精氨酸复合前体的作用使得发酵产生的有效复合物中丝裂霉素C含量大幅度提高至30-45％，从而可以大幅降低丝裂霉素C的生产成本，因此该制备丝裂霉素C的方法具有良好的工业化前景。

附图说明

图1为实施例1的高效液相图谱，图中横坐标是时间、纵坐标是峰高。

图2为实施例1的红外图谱，图中纵坐标是透过度、横坐标是波数。

图3为实施例2的高效液相图谱，图中横坐标是时间、纵坐标是峰高。

图4为实施例2的红外图谱，图中纵坐标是透过度、横坐标是波数。

具体实施方式

以下实施例用来说明本发明，但不限制本发明范围。

实施例1