[发明专利]抗H9亚型流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于动物病毒与动物传染病学检测技术领域，具体地说，本发明涉及抗H9亚型流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体，本发明还涉及抗H9亚型流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体在在制备H9亚型流感病毒双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒中的应用及双抗体夹心酶联免疫检测试剂盒和检测方法。 

背景技术

1975年，Kohler G和Milstein C在Nature杂志上发表了细胞融合法建立杂交瘤技术，创建了具有划时代意义的杂交瘤单克隆抗体技术。经克隆后产生结构和各种特性完全相同的高纯度抗体，称为单克隆抗体（Monoclonal Antibody，McAb），简称单抗。单克隆抗体技术的发现和使用，对现代生命科学研究的发展起到了巨大的推动作用，已经成为生物技术领域的一个重要方面。迄今，该技术的应用已经广泛应用于基础研究、疾病诊断、治疗、预防等方面。 

禽流感( Avian influenza, AI)是由 A 型流感病毒( Avian influenza virus, AIV) 引起的病毒性烈性传染病,是目前危害世界及我国养禽业最重要的疫病之一。H9亚型禽流感病毒最早由Hommee and Easterday(1970)从火鸡体内分离到。1994年，陈伯伦等(陈伯伦等，1994)从病蛋鸡体内分离到H9亚型AIV。此后，H9亚型AIV在我国广泛存在，多呈低致病性感染，并呈逐渐蔓延之势。至 1997 年, H9 亚型 AIV 广泛分布于各大洲。韩国、 爱尔兰、 意大利等国都有H9 禽流感暴发的报道, 说明其已在家禽中建立了稳定的种系。1998年从香港的家猪体内分离到2株H9亚型流感病毒，这是首次从哺乳动物体内分离到H9亚型流感病毒。1999从香港患流感的女孩体内分离到两株H9流感病毒，对这两株病毒的分析表明其所有的基因片段与AIV—A／Quail／Hong Kong／G1／97(H9)高度同源，是典型的禽源流感病毒，该毒株是香港人感染H5N1和H9亚型密切相关的分支代表株。2000-2001年，对中国南方地区的水禽(主要是家鸭) 进行流感病毒监测发现约10%水禽被H9 感染，感染率是20 世纪70 年代的4 倍。同样对这些 H9 毒株的基因片段进行克隆和测序分析, 结果证明, 对于 HA 和 NA 基因片段大多数与DK/ Y280/ 97 亚群毒株关系密切从而证明这些毒株HA 和NA 基因片段的陆禽起源。而其6 个内部基因片段遗传演化上则证实来自水禽并且这6 个内部基因片 段与2001 年香港暴发的H5N1 病毒内部基因片段关系紧密。据报道，A/ Quail/ Hong Kong / G1/ 97 株很可能参与了H9 亚型之间的基因重排从而产生了可感染人类的新型毒株。在猪体内也曾分离出了类人型的和类禽亚型的毒株, 二者很有可能在猪体内发生基因重排, 从而产生更加适应人源和禽源的毒株从而能突破种间屏障感染人。尽管还没有充分的证据表明 H9 亚型流感病毒能在人与人之间传播但其已经成为目前严重危害人类健康的重要传染病之一。 

藏鸡是世界上独一无二的宝贵遗传资源, 近年来,随着西藏农牧业产业结构的调整,藏鸡场集约化程度不断提高, 藏鸡养殖已经成为西藏地区农牧民增收致富的重要途径之一。但由于缺乏全面、 系统的鸡病防治技术,致使鸡的各种传染性疾病发病率很高,尤其是全球流感暴发和流行, 给藏鸡养殖业带来很大的经济损失, 严重挫伤了农牧民养殖的积极性。西藏地处我国西南边疆, 边境线漫长,与多个国家接壤,处在鸟类迁徙路线上,是我国野生鸟类重要聚集地之一, 其中有的国家的野鸟中已经检测到 AIV,这对西藏地区养禽业带来了严重的威胁。因此, 对藏鸡、 鸭等禽类进行H9亚型AIV 分子流行病学调查及生物特性研究为AIV 的预测预警提供理论依据是非常必要的。