[发明专利]从欧亚旋覆花中提取活性倍半萜内酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以菊科植物欧亚旋覆花干燥头状花序为原料提取纯化一种具有多种药理活性的倍半萜内酯的方法。 

背景技术

欧亚旋覆花【Inula britannica L.】，系菊科旋覆花属多年生草本植物。主要分布于新疆北部至南部、黑龙江（黑河、克山等）、内蒙古东部和南部、河北北部以及华北和东北的一些地区。其干燥花状头序为中药旋覆花的一种药材基源，具有降气、消痰、行水、止咳等功效，收入2010版《中国药典》。 

有研究表明，倍半萜内酯类化合物 I，化学名britanin，具有明显的催吐、刺激鼻粘膜和祛痰活性和明显的抑制霉菌（白色念珠菌、新型隐球菌、麯菌和石膏样癣菌）的活性[钱名堃, 等. 线叶旋复花化学成分的研究. 化学学报，1983，41（3），254-261]，并具有明显的抗原生动物（Entamoeba histolytica和Trichomonas vaginalis）的活性[Rubinchik, M. A., 等. Sesquiterpene lactones of higher plants as a possible source of new antiprotozoal drugs. Rastitel'nye Resursy, 1976, 12(2), 170-181.]。我们实验室近期的药理活性研究表明该倍半萜内酯还具有较强的抗体外肿瘤细胞（Hela细胞、HSC-T6细胞和B16细胞）的活性。上述研究表明该倍半萜内酯类化合物具有广阔的药用开发前景。 

发明内容

  本发明的目的是提供一种提取具有多种药理活性倍半萜内酯类化合物I的方法。

我们在对中药旋覆花进行系统研究中，发现该药材原料欧亚旋覆花干燥头状花序中富含大量假愈创木烷型倍半萜类化合物，其中化合物I的含量可达浸膏的3.2%。我们对该化合物的提取纯化工艺进行了研究，实现了快速、简便、大量地提取纯化化合物I，为进一步的药理学研究和药物开发奠定了基础。 

此外，我们还考察了工艺条件，整个工艺适合于大量提取纯化。  

一种以欧亚旋覆花干燥头状花序为原料，提取具有多种药理活性的倍半萜内酯的方法，其特征在于采用有机溶剂提取、乙酸乙酯萃取、柱层析分离和重结晶手段，快速、简捷、大量地提取纯化化合物I；

在上述方法中，总浸膏提取时溶剂与原料的物料比在5:1到10:1范围内，提取时如采用室温下浸提，则浸提3次，每次7天；亦可采用加热回流提取，提取3次，每次1小时；亦或采用超生提取其它现有技术进行提取；提取溶剂可选择80-95%乙醇或甲醇或工业丙酮。

在上述方法中，萃取溶剂选用工业乙酸乙酯。 

在上述方法中，硅胶柱层析时选用的溶剂体系为石油醚与乙酸乙酯的体积比8:1至1:4，或石油醚与丙酮体积比10:1至1:2，梯度洗脱；通过薄层层析检测，收集石油醚和乙酸乙酯展开体系下，Rf值约0.6，硫酸-乙醇显紫色的组分，于低于60^oC条件下减压浓缩。 

该方法具有成本低、操作简便、转化率较高、产品纯度较高的特点。 

经上述各方法得到的化合物I粗品可通过以下步骤进行纯化精制：通过一步硅胶柱层析分离纯化，以石油醚与乙酸乙酯的体积比为2:1或石油醚与丙酮的体积比为3:1的溶剂洗脱，再经重结晶，用石油醚和丙酮混合溶剂体系，得到的产品晶型规则（无色块晶）、熔点范围窄（188~190^oC），纯度可达95％以上（色谱测定）。 

本发明目标化合物提取纯化率约为88.7%，实现了快速、简捷、大量地提取纯化该化合物，该方法具有操作简便、成本低等优势，且得到的产品纯度高，适宜作为标准品及医药开发使用。 

附图说明

图1为倍半萜内酯类化合物 I结构式。 

图2为化合物I的单晶X-射线衍射结构图。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步说明本发明，但本发明并不局限于此实施例。 

实施例1：化合物I的提取纯化实验

① 欧亚旋覆花干燥头状花序30g ，用300mL 95%乙醇室温下提取3次，每次7天，滤出合并提取液，减压浓缩得总浸膏约2.9g 。

② 将该浸膏加3.2g 柱层析硅胶拌样，挥干溶剂后，用40g硅胶干法装柱，上样，以石油醚和乙酸乙酯体系（8:1-1:4，体积比）梯度洗脱。