[发明专利]正丙醇萃取法降低肝素钠中的半乳糖胺含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及从肝素钠中降低半乳糖胺含量的方法。 

背景技术

肝素钠是从猪小肠粘膜中提取的一种生化药品，是手术中不可替代的、挽救生命的、市场不能断档的首选药物。自二十世纪四十年代用于临床以来，其应用范围不断扩大，尤其是二十世纪九十年代以来，该产品临床主要用于防止血栓形成，治疗心血管病、血液病、尿毒症等。西方国家已开始研究肝素钠对癌症的防治作用，其新用途不断增加。 

进入二十世纪七十年代以来，我国肝素钠生产工艺不断改进，成为世界肝素钠产量最大的国家。国际市场的肝素钠产品有70％以上来自中国。肝素钠精品生产已由高锰酸钾氧化法发展到双氧水氧化法，结合醇洗分离法，将大量的杂质用乙醇带走。2008年2月11日，美国因注射肝素钠出现4例死亡，350多例不良反应，成为轰动世界的“肝素钠事件”。经过专家论证，上述死亡和不良反应是由于肝素钠中含有“多硫酸软骨素”所致。自“肝素钠事件”以来，美国FDA不断加强肝素钠产品的质量，美国专家认为“半乳糖胺”的存在会影响肝素钠的疗效，因此，将“半乳糖胺”的含量列入药典的标准，要求小于1％。中国和欧洲其他国家还未要求此标准，至今也还未有报道含量小于1％，目前国际上有许多厂家用热处理或冷处理的方法，但所用溶剂不同，含量只能降到5％左右，因此，我公司经研发后半乳糖胺的含量降到1％以下。 

发明内容

本发明提供了一种萃取法降低肝素钠中的半乳糖胺的方法，是为了攻克国 内外专家关于降低肝素钠中的半乳糖胺含量，利用半乳糖胺的性质，使其溶解在正丙醇中，然后将带有半乳糖胺的正丙醇去掉，留底部沉淀的肝素钠，从而实现用正丙醇萃取法降低肝素钠与半乳糖胺含量。 

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现： 

一种萃取法降低肝素钠中的半乳糖胺含量的方法，其特征在于：采用正丙醇萃取法将肝素钠中的半乳糖胺降低。 

在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：所述正丙醇萃取法包括如下步骤： 

(1)、用水溶解肝素钠半成品，水与肝素钠半成品的重量比为1∶(10-15)，将溶液PH值调至10.0-12.0，然后加入溶液体积的0.2-2％过氧化氢，氧化8-14小时； 

(2)、步骤(1)所得溶液中若有核酸和不溶性杂质析出，则先用离心机去除核酸和不溶性杂质，再进行后续步骤；若没有核酸和不溶性杂质析出，则按每升溶液加入氯化钠20-30g，将溶液PH值调至5.0-8.0后，再将溶液冷冻至-5℃以下，边搅拌边加入-10℃以下的丙酮，使得丙酮占溶液的40-45质量％，-5-0℃保温24-30小时，然后将废正丙醇弃去；QA取样，检测测吸光度：260nm≤0.1；400nm≤0.02可进行步骤(3)； 

(3)、弃去上层丙酮溶液后，下层固体肝素钠用水按固体体积1∶(10-15)溶解，溶解后将溶液PH值调至10.0-12.0，然后加入溶液体积的0.2-2％过氧化氢，氧化8-14小时； 

(4)、步骤(3)所得溶液中若有核酸和不溶性杂质析出，则先用离心机去除核酸和不溶性等杂质，再进行后续步骤；若没有核酸和不溶性杂质析出，则按每升溶液加入氯化钠20-30g，然后将溶液PH值调至10.0-12.0，再将溶液冷冻至-10℃以下，边搅拌边加入-10℃以下的正丙醇，使得正丙醇占溶液的35-50质量％，-3--6℃保温18-24小时，然后将废正丙醇弃去，半乳糖胺随正丙醇带走，沉淀物即为肝素钠产品；QA取样，高效液相检测DS含量≤1％； 

在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：沉淀后的溶液进行QA取样化验，测吸光度：260nm＜0.1；400nm＜0.02；DS含量≤1％，若不合格，继续重复上述过程，若合格移交下一工序。 

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是： 

本发明的肝素钠精品生产采用过氧化氢氧化法，将大量的杂质用丙酮带走，再用正丙醇萃取法降低肝素钠中的半乳糖胺含量，其精品活性效价在180usp/mg以上，折合WHO国际标准在200iu/mg，Xa/II a的比例在0.95-1.05之间，其他质量标准均符合中国药典、美国药典、英国药典及西欧药典所规定的各项指标。 

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。 

实施例1 

(1)、用水溶解肝素钠半成品100kg，用纯化水1000kg溶解，将溶液PH值调至10.0，然后加入过氧化氢3L，氧化9小时；