[发明专利]一种脑炎病毒蛋白及其编码基因和应用

说明书

本申请是申请号为201010506163.9、申请日为2010年10月9日、发明创造名称为“脑

炎病毒蛋白及其编码基因与应用”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种脑炎病毒蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

脑炎是由病毒直接侵犯或由病毒或其他异种蛋白引发的超敏反应所致的大脑急性炎症性疾病。脑炎可以是病毒性感染原发的临床表现，或者是继发的临床表现，引起原发的脑炎的病毒有脊髓灰质炎病毒，埃可病毒、柯萨奇病毒等流行性病毒，或散发性的通过蚊子、蜱等节肢动物传播的黄病毒属的森林脑炎和批膜病毒科甲病毒属的东方马脑炎病毒等。

甲病毒为披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员，以蚊蜱等吸血昆虫为传播媒介，可引起多种人畜共患传染病。近年来，国外已对多株甲病毒部分或全部序列测序。国内对这类病毒的分子生物学研究亦取得一定的结果。已有的研究结果表明：该病毒属中和抗体决定簇主要集中在结构蛋白E1和E2等糖蛋白上，其中E2蛋白上所占比例更高。加之近年来腺病毒载体因具有安全性好、宿主范围广、感染效率高等多种优点，被广泛用于基因治疗和基因工程疫苗研究，为此我们分析比较了多株甲病毒核苷酸序列，人工合成了同源性较高的3kb的核苷酸，利用腺病毒载体构建重组基因工程疫苗，为预防和治疗疾病奠定了基础。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种与脑炎病毒疫苗相关蛋白及其编码基因。

本发明提供的蛋白E2E3，人工合成，是如下1）或2）的蛋白：

1）由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白；

2）将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由1）衍生的蛋白质。

序列表中的序列2由529个氨基酸残基组成，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述蛋白质E2E3的编码基因也是本发明保护的范围，所述编码基因为如下1）-4）中任一所示的基因：

1）序列表中序列1所示的DNA分子；

2）序列表中序列1自5’末端第1-1589位核苷酸所示的DNA分子；

3）在严格条件下与1）或2）限定的DNA分子杂交且具有相同功能的DNA分子；

4）与1）或2）限定的DNA序列至少具有90%同源性且具有相同功能的DNA分子。

含有上述编码基因的重组载体、转基因细胞系、重组菌、表达盒或重组病毒也是本发明保护的范围。

所述重组载体为pAdeasy-1和重组穿梭质粒经过同源重组得到的；所述重组穿梭质粒是在载体pShuttle-CMV的KpNI和HindIII酶切位点间插入所述编码基因得到的。

所述重组病毒为重组腺病毒；所述重组腺病毒为将上述蛋白的编码基因转染宿主细胞获得的重组腺病毒。

所述宿主细胞为真核细胞，优选为离体的哺乳动物细胞，尤其优选为HEK-293细胞。

本发明的另一个目的是提供一种疫苗。

本发明提供的疫苗，其活性成分为如下任意一种：

1）所述的蛋白；2）所述编码基因；3）所述重组腺病毒。

上述重组腺病毒在制备疫苗中的应用也是本发明保护的范围。

所述疫苗为脑炎病毒疫苗。

上述重组腺病毒在制备提高IFN-γ活性的增强剂中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的实验证明，人工合成E2E3通过转染HEK-293细胞而组装成携带有目标抗原基因的重组腺病毒vAd-E2E3。重组腺病毒vAd-E2E3感染293细胞能有效表达目的蛋白；通过滴鼻途径接种BalB/C小鼠，利用间接免疫荧光技术检测特异性抗体水平，结果表明，所构建的重组腺病毒虽然产生特异性抗体的时间和维持的水平有所不同，但均产生了较好体液免疫反应，为进一步开展免疫保护实验提供了重要的数据支持。由于病毒在机体内极微量的蛋白表达即可激起免疫反应，因此构建的携带有脑炎病毒结构基因的重组腺病毒vAd-E2E3，有希望成为脑炎基因工程疫苗的候选疫苗株。

附图说明

图1为pAd-E2E3酶切鉴定图

图2为重组质粒Pac I酶切和PCR鉴定

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。