[发明专利]颌下腺特异表达多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠构建

说明书

技术领域

本发明涉及转基因技术领域，具体地涉及颌下腺特异表达多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠构建。 

基因组，是分子生物学的专有名词，其就是指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子，而BAC是指其中的一个比较长的片段。 

背景技术

目前，临床使用的NGF多为动物（小鼠）基因表达产物或为单拷贝人源NGF基因的转基因小鼠生产，因此小鼠颌下腺中NGF的表达量有限。因此，如何在保证小鼠颌下腺中特异性表达，同时能够增加其在颌下腺中的表达量是人们有待解决的技术问题。 

发明内容

本发明的目的是提供颌下腺特异表达多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠构建，通过如下步骤实现： 

（1）将5-6个hNGF基因串联并克隆到小鼠的KLK1B22基因的启动子后面； 

（2）所述小鼠的KLK1B22基因的启动子从BAC或基因组上面克隆，并采用ATG上游2kb左右的序列； 

（3）将所述小鼠的KLK1B22基因启动子的区域中RE1和RE2之间的片段从载体上切下来，且所述RE1和RE2之间的片段包括KLK1B22基因启动子及5-6个hNGF基因； 

（4）将切下来的所述RE1和RE2之间的片段中的hNGF基因片段纯化； 

（5）将经过纯化的hNGF基因片段通过原核显微注射的方法注射到小鼠受精卵细胞核内，以生产出具有在小鼠颌下腺内特异表达的多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠。 

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 

通过上述技术方案，本发明提供的颌下腺特异表达多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠构建，由于所述RE1和RE2之间的片段包括5-6个hNGF基因，当把经过纯化的hNGF基因片段通过原核显微注射的方法注射到小鼠受精卵细胞核内，就可以生产出能够表达多拷贝人源NGF基因的转基因小鼠。 

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。 

小鼠的KLK1B22基因启动子区域为chr7:51367043-51368116，长度为1074bp，其序列为：chr7:51367043-51368116 

TGTTGAGGGACATATGGGTTCTTTCCACCTTCTGGCTATTATAAAAAGGGCTGCTATGAA 

CATAGTATAACATGTATCCTTATTACCAGTTGGAACATCTTCTGGGTATATGCCCAGGAG 

AGGTATTGCTGGATCTACCAGTAGTGTCCAGTTTTCTGAGGAACCTCCAGACTGATTTCC 

AGAGTGGTTGTATAAGCTTGCAAACCCACCAGCAATGGAGGAGTGTTCCTCTTTCTCCAC 

ATCCTCGCCAGCATCTGCTGTCACCAGAATTTTTGATCCTAGCCATTCTGACTGGTGTAA 

GGTGGAATCTCAGGGTTGTTTTGATTTGCATTTCCCTGATGATTAAGTATGCTCAACATT 

TTTTCAAGTACTTCTCAGTCTTTCAGTATTCCTTGATTGAGAATTCTTTGTTTAGCAATT 

TTTAATGAGGTTATTTGAATTTCTGGAATTCAGCTCCTAATAGGAAAAGTAAAATCAGTG 

ATCCAACTTCCAAGTCCAAAATGAAGCATTTTGGCATTCTCCAAGGAAGGATTTGTATCT 

ACAGGGAGCTTGCAGCCCTCTAGGCTACCACTTGTGCAAAGACTCTGTTCTAACTGCAAC 

TTTCTGGGATAATCTTGGACTTGAGGTACAGGACCTTCCTTAGAGGTGTGGGTTAGGCAG 

CACTCGCTCCACTACCCTCCGTTAACACCAATTCACCATTGCCACGACCTTGACATCTGG 

CTAAGGTCCCTGGAACACTAACAGCTCCAGAAACAAAAGTCCATGCCCCACCCGATTTTA 

TCCTTGGGAAGGTATCCAGGGTGACCTAGGGCCTACTGGACATCAGGTGCAACAGGACCG