[发明专利]一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法

权利要求书

1.一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，其特征在于，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。

2.如权利要求1所述的观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，其特征在于，该方法的具体步骤是：

5.0mg/ml的GFP融合蛋白处理种子发芽至14天的水稻幼嫩植株的根尖0.5cm处24h，灭菌水漂洗4h，叶芽进行冷冻切片，PI对切片进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白在水稻植株内的转运；

将稻瘟病菌效应蛋白基因表达产物于4℃离心机离心收集菌体，用新鲜配制的缓冲液悬浮菌体；

在冰水浴上进行超生破碎细胞后离心收集上清。

处理是将该基因的原核表达产物纯化后按照5.0mg/ml的浓度处理种子发芽至14天的黑谷幼嫩植株的根尖0.5cm处24h，灭菌水漂洗4h，叶芽进行冷冻切片，PI对切片染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白在水稻植株内的转运。共聚焦显微镜观测到GFP融合蛋白已经从水稻根尖转运到叶芽。

3.如权利要求1所述的观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，其特征在于，缓冲液为20mM Tris-HCl，pH7.4；200mM NaCl；1mM EDTA；10mMβ-巯基乙醇。