[发明专利]单顺反子基因表达试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.单顺反子基因表达试剂盒，其含有独立基因转移体MAR-CAG-FAT1-polyA-MAR，其中MAR为牛核基质结合区；CAG为启动子；FAT1为n-3去饱和酶基因；polyA为终止区；所述的独立基因转移体无主干载体序列和任何选择标记。

2.根据权利要求1所述的单顺反子基因表达试剂盒，所述独立基因转移体的全序列为SEQ NO.：1。

3.权利要求1或2所述的单顺反子基因表达试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

利用图1所示的质粒载体pMAR-CAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA-MAR作为初始载体构建没有主干载体序列、没有抗性基因、没有荧光标记的安全载体，先用EcoR I和Not I对质粒载体进行双酶切，将FSTN、IRES、AcGFP1切掉，再插入一段中间序列T，通过此序列引入新的酶切位点，再通过新的酶切位点插入FAT1序列。

4.根据权利要求3所述的制备方法，所述的新的酶切位点是HindIII酶切位点。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述的FAT1序列通过如下引物进行PCR获得：

FAF3正义链：

5′AATCGaagctt CTGGTTATTGTGCTGTCTCAT  3′

FAR4反义链：

5′AATCGgcggccgcCTCATCACTTGGCCTTGG  3′

。

6.根据权利要求3-5任意一项所述的制备方法，其特征在于插入FAT1序列通过Sac I、Af1 II双酶切获得MAR-CAG-FAT1-polyA-MAR单顺反子基因表达盒。