[发明专利]一种人膀胱癌细胞化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析以及临床诊断医学领域，具体地，本发明提供一种人膀胱癌细胞的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统中最常见的肿瘤。血尿是膀胱癌患者临床早期症状之一，有肉眼血尿和镜检血尿。然而血尿在尿路炎症以及结石症状下也有发生，并不是膀胱癌的特异性症状。正是由于膀胱癌早期症状不明显，以至于发现有血尿，患者膀胱肿瘤一般发展为较大的肿瘤结节。寻找特异的膀胱癌诊断方法对早期膀胱癌诊断有重要的临床应用价值。

膀胱癌的早期诊断方法有以下几种：

1)尿液分析：血尿出现后的首先便是进行尿液分析，以便排除是否是由于尿路炎症引起，并不能确定患者是否患膀胱癌；

2)尿脱落细胞分析：对尿沉渣中的尿脱落细胞进行显微镜下观察，可以鉴别并区分恶化的肿瘤细胞和正常细胞。但灵敏度不高，早期膀胱癌容易被漏检；

3)超声、CT或者MRI成像观察：对肿瘤的大小和恶化程度可以直接进行图像观察，准确度较前面方法大大提高。尽管近年来成像技术的不断进步，灵敏度不断提高，但对较小的肿瘤观察仍然不够，易漏检；

4)膀胱镜观察：膀胱镜通过尿路进入膀胱，进行膀胱内可视观察，从而发现早期的肿瘤。能够检出2)、3)中漏检的大部分患者。

目前早期诊断膀胱癌细胞特异性最高的是通过膀胱镜的观察，荧光膀胱镜的应用提高了检测灵敏度。但患者一般需要临床跟踪观察，从而能及早发现肿瘤发生或复发状况。然而，膀胱镜观察会对患者造成身体不适。另外，目前荧光膀胱镜检测所需荧光染料特异性不高，且对人体有一定的负面影响。因此，在膀胱癌的早期诊断方面，人们一直在探索更特异、灵敏的检测方法，尽可能的利用特异的肿瘤标志物实现方便、快速的检测。

实现尿样中的膀胱癌标志物或者细胞的检测，进行实时检测在临床诊断方面具有重要的应用价值。目前商业化的可用的膀胱癌的标志物有：人补体因子H相关蛋白(膀胱肿瘤抗原，BTA试剂盒)、高分子量的癌胚抗原和两个膀胱癌细胞相关的粘附分子(美国Scimedx Corp公司的Immunocyt试剂盒)、核基质蛋白22(NMP22)、3、7和17号染色体的异倍体以及P16肿瘤抑制因子9p21位点的缺失(UroVysion试剂盒)。BTA是指人补充因子H相关蛋白，BTA检测需要专业操作人员在标准实验室进行，灵敏度达到57-83％，特异性60-92％，血尿患者的特异性只能达到46％。另外良性前列腺增生、肾结石以及尿路感染等情况均影响BTA检测的特异性；Immunocyt试剂盒通过免疫荧光检测尿脱落细胞，尽管灵敏度以及特异性很高，但为了达到较高的准确性需要进行大量的尿脱落细胞检测，因此在膀胱癌病人的治疗以及预后观测方面具有很高的应用价值，但应用在早期诊断方面差强人意；其中NMP22是目前应用最广的膀胱癌标志物，ELISA试剂盒的市场化实现了膀胱癌早期诊断的方便、快捷检测，检测灵敏度和特异性也很高，但是在有病毒感染、肾/膀胱结石等情况下，仍会出现假阳性；UroVysion试剂盒采用的是多靶标的荧光原位杂交(FISH)技术，尽管灵敏度与特异性得到极大提高，美国FDA批准，但与Immunocyt试剂盒类似，需要检测大量的尿脱落细胞。

结合目前的膀胱癌标志物的应用以及膀胱癌的诊断现状得出：一方面，新的特异的膀胱癌标志物仍是研究的重点，制备早期诊断试剂盒，实现快速检测，在膀胱癌的诊断方面具有重要的临床价值；另一方面，进行尿样中的细胞检测，避免炎症、血尿等非特异症状的影响，准确性最高。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明着眼于膀胱癌的早期诊断与膀胱癌病人的跟踪观察，拟解决现行的膀胱癌诊断方面的难题，即采用特异的识别膀胱癌细胞两株单克隆抗体，实现膀胱癌细胞的双抗体识别与捕获，结合高灵敏的化学发光免疫分析方法，定量检测尿脱落膀胱癌细胞，不需要昂贵的检测仪器，便于临床推广，具有良好的市场应用价值，将会弥补市场现有试剂盒的不足。

本发明的目的是提供一种特异的膀胱癌细胞捕获、识别方法，以及高灵敏检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种用于膀胱癌早期诊断、术后监测的试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

(二)技术方案

本发明具体提供以下试剂盒：

[1]一种用于检测人膀胱癌细胞的试剂盒，所述试剂盒包括两种特异识别膀胱癌细胞表面抗原的单克隆抗体。

[2]根据[1]所述的试剂盒，所述试剂盒包括：

1)膀胱癌EJ细胞标准品；