[发明专利]一种影响骨骼矿化作用药物的筛选系统

权利要求书

1.钙黄绿素作为染剂在制备用于筛选矿化程度药物筛选系统中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤如下：

A、斑马鱼样本前处理：在标准规格的细胞培养板中，加入1～30条发育至3天大的健康斑马鱼幼鱼，加入药物溶液，然后用胚胎培养液补至每培养孔中液体体积不小于1ml，加盖封闭，28℃培养箱中培养72h～96h，得施药斑马鱼；

B、染色：取施药斑马鱼，加入钙黄绿素溶液，钙黄绿素溶液质量浓度为0.1~0.3%，染色1～2.5小时，制得染色斑马鱼；

C、清洗：将染色斑马鱼用胚胎培养液清洗，然后用胚胎培养液培养2～4h，再用胚胎培养液清洗鱼体至胚胎培养液为无色；

D、荧光定量：在荧光条件下对显示黄绿色荧光部分进行面积统计分析。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的标准规格的细胞培养板，是指6孔、12孔、24孔、48孔、96孔细胞培养板。

4.一种钙黄绿素为染剂的骨骼矿化作用的药物筛选系统，其特征在于，包括：

受试组的斑马鱼胚胎：实验前将健康成年斑马鱼放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培养液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光环境下培养3天，然后加入待筛选药物溶液，继续培养72h～96h，获得受试药物组；

阳性控制组的斑马鱼胚胎：实验前将健康成年斑马鱼放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培养液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光环境下培养3天，然后加入阳性对照药物溶液，继续培养72h～96h，获得阳性控制组；

阴性控制组的斑马鱼胚胎：实验前将健康成年斑马鱼放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培养液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光环境下培养，时间与阳性控制组和受试组相同，获得阴性控制组；

钙黄绿素染剂：质量浓度为0.1~0.3%的钙黄绿素溶液；用于对已矿化之骨头进行活体荧光染色；

影像采集系统：用于对受试组的斑马鱼胚胎、阳性控制组的斑马鱼胚胎、阴性控制组的斑马鱼胚胎的鱼体脊椎骨的位置进行影像采集，分别得到受试组的斑马鱼胚胎、阳性控制组的斑马鱼胚胎、阴性控制组的斑马鱼胚胎的鱼体影像；

影像分析及统计软件：用于对受试组的斑马鱼胚胎、阳性控制组的斑马鱼胚胎、阴性控制组的斑马鱼胚胎的鱼体脊椎骨影像进行分析，分别得到受试组的斑马鱼胚胎的影像平均面积数值、阳性控制组的斑马鱼胚胎的影像平均面积数值以及阴性控制组的斑马鱼胚胎的影像平均面积数值。

5.如权利要求4所述的药物筛选系统，其特征在于，所述阳性控制组的斑马鱼胚胎中阳性对照药物为促进骨骼矿化作用的阳性对照药物或者用于抑制骨骼矿化作用的阳性对照药物，促进骨骼矿化作用的阳性对照药物为阿仑唑奈，维生素D3，钙三醇或副甲状腺激素特立帕肽中的一种；抑制骨骼矿化作用的阳性对照药物为6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-(4-吡啶基)吡唑并[1，5-a]嘧啶。