[发明专利]用于固定二氧化碳的构建体、菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种构建体，其包含第一基因和第二基因，其中所述第一基因选自：

1）磷酸核酮糖激酶(Prk)基因(EC2.7.1.19)；

2）其核苷酸序列与1）中的基因的核苷酸序列具有至少80%同一性，优选地至少85%同一性，更优选地至少90%同一性，更优选地至少95%同一性，例如至少96%同一性，至少97%同一性，至少98%同一性，或至少99%同一性，并且编码具有磷酸核酮糖激酶活性的蛋白质的基因；和

3）其核苷酸序列在严紧杂交条件，优选高严紧杂交条件下能够与1）中的基因的核苷酸序列杂交，并且编码具有磷酸核酮糖激酶活性的蛋白质的基因；

并且其中，所述第二基因选自：

4）1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)基因(EC4.1.1.39)；

5）其核苷酸序列与4）中的基因的核苷酸序列具有至少80%同一性，优选地至少85%同一性，更优选地至少90%同一性，更优选地至少95%同一性，例如至少96%同一性，至少97%同一性，至少98%同一性，或至少99%同一性，并且编码具有1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性的蛋白质的基因；和

6）其核苷酸序列在严紧杂交条件，优选高严紧杂交条件下能够与4）中的基因的核苷酸序列杂交，并且编码具有1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活性的蛋白质的基因。

2.权利要求1的构建体，其还包含与第一基因和/或第二基因可操作地连接的表达调控序列，例如启动子，终止子，和/或增强子。

3.权利要求2的构建体，其中所述启动子是组成型启动子或诱导型启动子，优选地所述启动子选自:T7启动子，CMV启动子，pBAD启动子，Trc启动子，Tac启动子，lacUV5启动子，更优选地所述启动子是T7启动子。

4.权利要求1-3任一项的构建体，其中所述磷酸核酮糖激酶(Prk)基因是来源于蓝细菌(例如鱼腥藻、聚球藻或集胞藻)或绿藻(例如原绿球藻)的磷酸核酮糖激酶(Prk)基因；例如所述磷酸核酮糖激酶(Prk)基因编码SEQ ID NO:7所示的蛋白；例如所述磷酸核酮糖激酶(Prk)基因具有如SEQ I D NO：1所示的序列。

5.权利要求1-4任一项的构建体，其中所述1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)基因是来源于蓝细菌(例如鱼腥藻、聚球藻或集胞藻)或绿藻(例如原绿球藻)或植物(例如拟南芥)的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)基因；例如所述1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)基因编码SEQ ID NO:8-10所示的三个亚基；例如所述1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)基因具有如SEQ ID NO：2所示的序列。

6.权利要求1-5中任一项的构建体，其中所述构建体还可以包含用于筛选转化体的标记基因；优选地，所述标记基因是卡那霉素抗性基因，红霉素抗性基因或壮观霉素抗性基因。

7.一种载体，其包含权利要求1-6中任一项的构建体。

8.包含权利要求1-6中任一项的构建体和/或权利要求7的载体的宿主。

9.权利要求8的宿主，其是异养微生物，例如异养细菌、真菌和酵母，例如，酿酒酵母、毕氏酵母、黑曲霉、大肠杆菌、醋酸杆菌、假单胞菌、短杆菌、棒杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、丙酮丁醇芽孢梭菌、丁酸梭状芽孢杆菌、巴氏芽孢梭菌，优选大肠杆菌。

10.权利要求8的宿主，其是保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心且保藏号为CGMCC No.5435的大肠杆菌。