[发明专利]可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断精神分裂症的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒及其应用。 

背景技术

精神分裂症（Schizophrenia）是重大的精神疾病之一，精神分裂症可引起思考方式及情绪反应的崩溃，具体表现有感觉、知觉、思维、情感以及意志行为等障碍。精神分裂症是一种遗传因素和环境心理因素共同作用引起的疾病。据了解，中国目前的精神分裂症患者高达780万。全世界，每100人中就有一名精神分裂症患者。当前虽然精神病学研究主要致力于神经科学领域，但至今未找出合理的发病机制。因此，开展可行性的精神分裂症研究具有很大的前景。 

多巴胺受体D4（DRD4）分布于中脑边缘区，是由基因编码的一种G蛋白偶联受体，而DRD4基因位于11p15.5（第11号染色体短臂15区5带）。目前国内外的研究已经证明“精神分裂症的临床症状是由于中枢多巴胺活动过强造成的”。而且也有研究背景表明基因的甲基化是在不改变DNA序列情况下，影响基因表达。基因甲基化和精神分裂症之间是否存在相关性有待进一步验证。目前，国内外还没有公开任何关于用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒的相关研究报道。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒及其应用，其中DRD4基因甲基化水平与精神分裂症患病率呈负相关，检测效率高，针对性强。 

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒，该试剂盒包括一对DRD4基因启动子区甲基化特异性扩增引物及甲基化特异性测序引物，其中 

所述的甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’- GTGAATTTAGGAGGTTGGGGTAGA -3’；

所述的甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’-Biotin- CAAAAAAACAAACAACCCCTCTAA -3’；

所述的甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示：

5’- TTGGGGTAGAGATTAGT -3’。

一种可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒的应用，在外周血检测中，该试剂盒可用于男性人群精神分裂症的辅助诊断、检测或筛查药物中。 

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了可用于检测与精神分裂症相关的DRD4基因甲基化程度的试剂盒及其应用，DRD4基因启动子区域的高甲基化水平导致DRD4基因的低表达，从而影响DRD4在脑部通路转运的循环量减少，最后导致精神分裂症的发生和发展。因此DRD4基因甲基化水平与精神分裂症患病率呈负相关，以检测DRD4基因启动子区甲基化水平为基础的诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对精神分裂症的检测，检测效率高，针对性强，同时，以DRD4基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为精神分裂症辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。 

附图说明

图1为DRD4基因被检测序列所在区域以及所检测的5个CpG点的关联分析结果；（例如CpG1与CpG2的相关系数为0.98，CpG2与CpG3的相关系数为0.95） 

图2为甲基化水平检测结果示例:表示甲基化程度，如图示CpG1到CpG5的甲基化程度分别为76%，68%，87%，100%，98%, 87%；图中阴影部分显示的是对应CpG位点的信号强度，结合该位点附近碱基种类可分析得到其甲基化水平（即阴影框对应的上方数字）。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。 

具体实施例

1、研究对象的收集 

从某医院收集精神分裂症患者，总共354例，同时收集300名正常者作为对照组，经过年龄（最终选定样本的年龄均在30岁上下）、性别、知识背景以及DNA相关浓度这些数据的分析，筛选出匹配指数（年龄，学历，性别）较高的实验样本量： 30名精神分裂症患者（15名男性+15名女性），30名正常对照组（15名男性+15名女性）。

2、基因组DNA的提取