[发明专利]可用于检测与冠心病相关的PLA2G7基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与冠心病相关的PLA2G7基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease, CHD）简称冠心病，是心血管疾病的重要组成部分。据世界卫生组织（World Health Organization, WHO）报道，CHD是世界上致死和致残的主要原因之一，在2008年，约有1730万人死于CHD, 在2030年之前，据估计将有2360万人将死于CHD。CHD症状表现为胸腔中央发生一种压榨性的疼痛，并可迁延至颈、颔、手臂、后背及胃部。发作的其他症状可能有眩晕、气促、出汗、寒颤、恶心及昏厥。严重患者可能因为心力衰竭而死亡。CHD是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，寻找其相关基因进而阐明冠心病发病的遗传机制已经成为目前研究的热点。虽然有越来越多的医学研究机构重视并开展冠心病的相关研究，但研究多集中于相关候选基因的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism, SNP）与冠心病的关联性上，其发病机理仍未被完全阐释清楚，这无疑妨碍了冠心病病理机制的理解和预防治疗水平的提高。

基因PLA2G7的功能是编码脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA₂），Lp-PLA₂能够催化产生各种致炎因子，水解氧化磷脂以形成溶血磷脂胆碱，还能氧化脂肪酸。已有文献报道Lp-PLA₂的高活性以及量的增加能提高冠心病的风险。目前国内外已有不少研究报道了基因PLA2G7单核苷酸多态性与CHD发病的关系。但是，目前国内外还没有公开任何关于冠心病相关的基因PLA2G7启动子区甲基化程度的试剂盒的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于检测与冠心病相关的PLA2G7基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，其中基因PLA2G7甲基化水平与冠心病的患病率在男性中呈负相关，在女性中呈正相关，并且检测效率高，针对性强。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与冠心病相关的PLA2G7基因启动子区甲基化程度的试剂盒，其特征在于：一对PLA2G7基因启动子区甲基化特异性扩增引物及其甲基化特异性测序引物，其中所述的甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

5’-GTTTTGGGGAGGGTGTTG-3’；

所述的甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

5’-Biotin-ACCAACCCCTATCCCCCTAACTA-3’；

所述的甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示：

5’-AGTATTATTAGGGGAGGA-3’。

一种可用于检测与冠心病相关的基因PLA2G7启动子区甲基化程度的试剂盒的应用，其特征在于：在外周血检测中，该试剂盒可用于冠心病辅助检测、诊断或药物治疗中。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明首次公开了可用于检测与冠心病相关的PLA2G7基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，在男性中，启动子区域的低甲基化水平导致基因PLA2G7的高表达，从而影响脂蛋白磷脂酶A₂的转录与翻译，最后导致冠心病的发生和发展；而在女性中，启动子区域的高甲基化水平将导致冠心病的发展和发生。而且基因PLA2G7启动子区域甲基化水平可通过外周血检测得到，因此测定外周血中基因PLA2G7启动子区域的甲基化水平，为检测冠心病的进展以及人群筛查和药物开发提供了新视野。

综上所述，以基因PLA2G7启动子区域甲基化水平为基础的诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对冠心病的检测，同时，以PLA2G7基因启动子区域DNA甲基化为靶点的药物有望成为冠心病辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。

附图说明

图1为被检测序列所在区域（具体位置为Chr6:46703038-46703274），以及所检测的4个CpG点之间的关联性分析结果（因为4个CpG岛之间相关系数r均大于0.8，存在显著相关，所以取平均值代表整体甲基化水平）；